trizol提rna实验步骤

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

费苏茂3041trizol方法提取RNA过程中哪一步加DNase处理 -
弓谦茅17114351023 ______[答案] 我的方法里没用DNase,效果也不错,取约5*106个细胞,经PBS洗涤后,加入800μL TRIzol,混合后室温放置5分钟,再加入196μL氯仿,振动15至30秒,室温放置2至3分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,小心将上层液体转移至新管中,加...

费苏茂3041TRIzol法提取流感病毒RNA每个步骤详细注意事项? -
弓谦茅17114351023 ______ 三、Trizol法提取法(这是提禽流感病毒的步骤,供参考) Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.1、取鸡胚尿囊液,加入5-10倍体积Trizol液,混匀;2、室温放置5分钟,然后以每1ml Trizol液加...

费苏茂3041trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA? -
弓谦茅17114351023 ______[答案] 如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常...

费苏茂3041Trizol法提取流感病毒 RNA -
弓谦茅17114351023 ______ 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管; 2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀; 3、13000rpm离心15min; 4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...

费苏茂3041怎么提取RNA? -
弓谦茅17114351023 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

费苏茂3041我用Trizol试剂盒提枇杷的RNA提了三次,每次都是黑色的,跑电泳也没有, -
弓谦茅17114351023 ______[答案] 加异丙醇离心后,出来的应该是白色的胶状沉淀.如果是黑色,说明含有较多色素啊,杂质啊,RNA含量太少.很多组织就是这样,比较难提.第一部研磨完离心的多离心一会,说明书说离心说离心10~15min,你可以离30min.

费苏茂3041用trizol提取rna时,为什么dna不会溶解在水相 -
弓谦茅17114351023 ______ 提取RNA时如何去除DNA的污染的方法: 注意实验室的标准化问题,注意污染的存在,同时严格按照说明书上的操作应该没有 问题.发现DNA污染,用DNAse I 消化1小时,37度 离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体...

费苏茂3041骨组织RNA的提取注意事项,为什么提取出来的RNA降解严重 -
弓谦茅17114351023 ______[答案] RNA提取的时候,一定要注意防止RNA酶作用. 第一点,样本处理和存放最好都放负80冰柜. 第二点,实验过程中你可以使用DEPC水泡过的枪头,离心管,保持手套干净,带好口罩,不要说话. 第三点,假如你用Trizol提取RNA,75%的乙醇也最好采...

费苏茂3041trizol法提取RNA时如何去除基因组DNA 在哪一步加NDA消化酶,谢谢! -
弓谦茅17114351023 ______ trizol法是RNA, DNA提取的,在分层的时候,看你去哪一层了.分层后, RNA是在水相,而DNA是在中间的酚-氯仿层.“一般在加入溶解细胞剂,充分 溶解...

费苏茂3041请问Trizol试剂提取RNA相关问题,请问下为什么在Trizol试剂提取RNA时,加入氯仿离心后RNA在上层水相,DNA在中间层,蛋白质在下层有机相,但用... -
弓谦茅17114351023 ______[答案] 我记得是pH值的关系 不过也没那么严格,实际上提取RNA后如果可能,还是需要一步加入DNase消化的过程