wb中封闭液的作用

聂烟帖1229蛋白电泳WB中的重复利用问题 -
古录星19145694236 ______ 电泳液和转膜液都可重复利用3次左右 考马斯亮兰染液也可以重复用.新配的染液10分钟即可,重复3次后要染30分钟. 一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.

聂烟帖1229请问WB是干什么的有什么作用?
古录星19145694236 ______ WB即是指WesternBlot印迹方法,又称为免疫印迹,是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙,烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合,再与经辣根过氧化物酶标记(偶联)的二抗结合,最后用E,CL超敏发光液试,剂检测.如果转印膜上含有靶蛋白,经X光片曝光、显影,后,则会在X-光片上出现特异性蛋白,条带,详情可以咨询菩禾生物.

聂烟帖1229wb封闭用的牛奶还能再稀释抗体吗 -
古录星19145694236 ______ 封闭及稀释抗体最好用脱脂奶. wb封闭用的还能再稀释抗体,但是效果会变差.不值得浪费你的时间还抗体等试剂,脱脂奶很便宜(比较抗体而言). 建议另用新鲜配置的. 建议在配制封闭液(脱脂奶加缓冲液等)时 多配点,到足够封闭和稀释抗体用的,分开使用为好.

聂烟帖1229请教western blot转膜的原理 -
古录星19145694236 ______ 原理: 1. 电场力作用条件下,带电粒子(PAGE胶中的蛋白)会发生定向迁移; 2. 蛋白大小如果超过膜孔径(0.22μm or 0.45μm),不会透过膜; 3. WB用的膜具有蛋白吸附作用;

聂烟帖1229WB中二抗孵育后不能马上显色,这时候膜最好怎么处理?转膜前NC膜最好又该怎么处理呢?抗体最好好用什么稀 -
古录星19145694236 ______ 漂洗几次后放在TBST或者你用来incubate的buffer(不加奶粉或者BSA)里面,放在4度 不同的抗体适用于不同的缓冲液,大部分可以用TBST

聂烟帖1229western blot一抗后放了封闭 -
古录星19145694236 ______ 前面已经被人答了,我就答一下补充问题吧,一抗可以回收2~3次,但是效价会降低.Transfer旧液可以用来泡海绵滤纸和膜,每次转膜时还是用新液较好.

聂烟帖1229可以用人血清直接包被于干板上吗 -
古录星19145694236 ______ 1)聚苯乙烯材料能吸附蛋白质. 2)选择什么包被取决于你要检测什么,是抗原还是抗体.我们一般用HIV HCV 人IgG 包被来检测HIV HCV的病毒抗原.用HBsAg包被,来检测抗HBsAg抗体. 3)CB是碳酸盐缓冲液吧,在pH9.6的碳酸盐缓冲液中,蛋白质能吸附在聚苯乙烯表面. 4)封闭的作用是封闭非特异性结合位点;防止抗原或抗体的非特异性吸附. 5)封闭后加的东西取决于试验方法;间接法一般是抗体,双抗夹心法一般是抗原. 5.)Na2CO3 NaHCO3是配制碳酸盐缓冲液的一对缓冲试剂, NaN3是防腐作用. 封闭液的作用是封闭非特性吸附位点.一般含有动物血清或BSA.包被即可能是抗原也可能是抗体,看你要测什么,选什么方法.

聂烟帖1229有些文章中WB结果中有Marker,是怎么做到的 -
古录星19145694236 ______ 可能可以通过下面几个方法实现(仅供参考): 1. 使用预染 Marker,不过分子量不是特别准; 2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位,比如都带有 His 融合标签; 3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色,然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置.

聂烟帖1229IMF和WB的作用和职能的区别? -
古录星19145694236 ______ IMF主要向会员国提供短期贷款,指导成员国摆脱国际收支困境.WB主要是向发展中国家提供长期性贷款,促进发展中国家的发展与进步.