wb实验封闭的作用

桑饼辰3144如何制备免疫沉淀(IP)样本? -
常禄山19618056824 ______ 常用于免疫沉淀的抗体量非常大(1ug),所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻链分子时,重链或者轻链分子的WB信号常常由于信号过强而导致影响对目的蛋白的WB结果判断.针对上述情况,A B clonal通常有二种解决办法: a. 选择不同种属的抗体分别进行免疫沉淀实验和WB实验,这样再选择一个种属交叉反应比较弱或者无种属交叉反应的二抗进行WB实验,就可以大大减弱重链和轻链分子的WB信号. b. 使用交联剂将抗体和Protein A/G beads交联,然后通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白-抗体-agarose beads复合物,最后离心去除抗体-agarose beads复合物,上清中只留下目的蛋白.

桑饼辰3144如何选择到适合自己实验的抗体 -
常禄山19618056824 ______ 1. 一抗选择 (1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息.(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS.每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该...

桑饼辰3144wb实验中,为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致?同样的电压可以吗? -
常禄山19618056824 ______ 浓缩胶的目的使得loading的样品能够在同一条水平线上进入分离胶,如果电压太大前端的蛋白容易在后面的蛋白赶上来前进入分离胶.而在分离是理论上(实际上也是)小电压长时间分离的效果会更好,但是在操作过程中没有必要等那么长的时间,所以就用大电压快点跑.

桑饼辰3144loading control是什么意思啊? -
常禄山19618056824 ______ 在WB试验中中,最重要和最不可或缺的对照就是内参照(Loading Control,Internal Control). 内参照的使用有两个方面的作用: 1、 是检测整个WB实验过程及体系是否正常工作,如果一个实验连内参照都出不料阳性结果的话(在内参抗体有效的情况下),那么这个体系就是存在问题的了 2、 半定量的标准:内参一般选择的管家基因编码表达的蛋白,在很多组织和细胞中中都是稳定表达的,因此可以作为检测靶蛋白表达量的标准.

桑饼辰3144western blot的具体步骤? -
常禄山19618056824 ______ (PS 楼主可以百度嘛,网上关于WB的实验太多了) Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测. 一...

桑饼辰3144wb封闭用的牛奶还能再稀释抗体吗 -
常禄山19618056824 ______ 封闭及稀释抗体最好用脱脂奶. wb封闭用的还能再稀释抗体,但是效果会变差.不值得浪费你的时间还抗体等试剂,脱脂奶很便宜(比较抗体而言). 建议另用新鲜配置的. 建议在配制封闭液(脱脂奶加缓冲液等)时 多配点,到足够封闭和稀释抗体用的,分开使用为好.

桑饼辰3144western blot这个技术为什么不同人做出来的结果会相差那么远呢? -
常禄山19618056824 ______ 与实验条件和每个人的实验习惯有关系.在操作规范,实验者素质较高的实验室western的结果可重复度还是很高的. 但是western毕竟是一个定性或半定量的实验,过程繁琐,中间的很多步骤很容易造成误差.从取样,到电泳上样,转膜,封闭,加抗体,显影,每一步都会有误差.

桑饼辰3144蛋白杂交尼龙膜如何使用 -
常禄山19618056824 ______ 尼龙膜在western blot用来转移胶中的蛋白,也就是转膜步骤.步骤请看:http://www.zlbj.com.cn/zlbj_Article_14293.html 尼龙膜特点:3. 尼龙膜 尼龙膜更多是用于核酸的转移,也有见于蛋白印迹,比如dot blot,比较于NC膜来说,它的优点是结合...