western一抗稀释液配方

熊林黎1987求助,糖蛋白western blot结果中分子量的问题 -
终迹疮13548702953 ______ 首先你要排除假阳性:可以做一下阴性对照,也就是用同样的上样量跑四个孔,两个孔用一抗孵育,两个孔用一抗稀释液孵育.如果一抗孵育出条带和,稀释液孵育不出条带,那基本可以认为,你的条带是阳性条带.ECL假阳性比较少,而DAB假阳性是很多的. 第二,marker在确定分子量方面是比较粗略的,尤其是那种条带比较少的marker,你可以换一个marker再跑一下. 第三,再查一下文献看一下,你的蛋白有无亚型.也可以去抗体公司问一下,他们做出来的结果是怎样的.也许在实际的western条带中,这个蛋白的分子量就是比预测的分子量大的.

熊林黎1987western - blot实验中一抗和二抗的浓度对实验结果的影响? -
终迹疮13548702953 ______ 浓度太低肯定不行啊 一般一抗1:1000 没有条带 排除其他原因的话再提高浓度 二抗1:2000-5000都行 没有条带一般不会是二抗浓度的问题

熊林黎1987western常用的试剂和耗材有哪些,哪些公司比较好,并有哪些注意事项. -
终迹疮13548702953 ______ 丙烯酰胺 、N,N'-亚甲双丙烯酰胺 、十二烷基硫酸钠 、Tris-HCL 、Tris、TEMED 、巯基乙醇 、甘氨酸 等 一抗是WB中最重要和最贵重的试剂,也是我们主要要推得产品. 主要品牌:Abcam(质量稳定,价格比较贵)、CST(质量稳定,价格...

熊林黎1987western blotting中的一抗和二抗有什么用 -
终迹疮13548702953 ______[答案] 一抗就是针对你的蛋白的抗体,一般比较特异,若你的蛋白不是常见的,则需要定制(譬如用你的蛋白注射兔子) 二抗是针对一抗的抗体,看你的一抗来自哪种动物,它具有普遍性.不管你的蛋白是什么,只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗,...

熊林黎1987ELISA中如何确定与抗原反应的一抗是饱和的? -
终迹疮13548702953 ______ 将抗原做浓度曲线,如抗原量大于一抗量则出现钩状效应,也可将作标曲与抗原对比在哪个浓度 包被抗体浓度确定: 可通过棋盘滴定法进行测定,但用单项滴定法更为简便,其方法是将一抗进行一系列稀释包被微量反应板,再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤,再加酶结合物进行反应,经孵育洗涤后,加底物溶液显色,终止反应后分别测定O.D值,选择O.D值≥1.0的那个一抗稀释度为最适包被浓度.一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0,而不选择小于1.0的一抗浓度.阴性参考血清O.D值要求包被的浓度过大会出现前带效应,浓度太小会出现后带效应(钩状效应)

熊林黎1987细胞裂解液 用什么稀释 western -
终迹疮13548702953 ______ 可以用细胞裂解用的溶液,或者PBS,tris-NaCl溶液进行稀释.

熊林黎1987荧光western blot应注意些什么 -
终迹疮13548702953 ______ 荧光western blot应注意: 抗体浓度应当优化,在几种不同稀释度的抗体中孵育膜.选择信噪比最高的稀释度. 从化学发光转到荧光检测时,一抗浓度应当增加;通常来说是增加2-5倍.二抗浓度可能也需要优化;1:5,000稀释是个不错的起点....

熊林黎1987做western上样前样品要混匀吗 -
终迹疮13548702953 ______ Western Blot Quick Guide(以及一天跑完Western的时间规划) 前期准备:蛋白已经定量,各样本已经稀释到某固定浓度,已经和SDS loading buffer混合,已经分装好,保存与-20°.头天下午或晚上配胶,分离胶和浓缩胶一起配好,带上梳子...

熊林黎1987western blot,二抗用水稀释,会有什么问题 ?
终迹疮13548702953 ______ 抗体会很快失效

熊林黎1987western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加... -
终迹疮13548702953 ______[答案] 一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体,而不是磷酸盐.只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗,加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景.至于是使用PBS(T)还是TBS(T),这要具体看你的二抗种类.PBS不适合AP系列,PBS/TBSS...