western封闭液的配制

昌空启4624southern blot 牛奶封闭液如何配置 -
仲娟宇15068041456 ______ Southern Blot 为什么要配牛奶封闭液啊?是最后孵育的一部要加抗体吗?如果是封闭抗体的话,一般就配5%的脱脂奶粉,5%多半指的是个g/100ml.也就是5g奶粉,100ml水的比例,完全溶解即可.如果担心牛奶里面有小颗粒没有溶解,可以用0.22um的膜过滤一下,防止有颗粒在膜上形成斑点的背景.

昌空启4624Western - blotting中非特异条带太多 -
仲娟宇15068041456 ______ 湿法转移转移的确从来没什么短路的情况,半干转移才要特别注意,不过后者基本上不用,我们做了比较的,稳定性和重复性前者要好得多,当然对于高手来说也无所谓,但我觉得能做湿法的尽量还是用湿法. 1. 这种情况下我们通常会同时跑...

昌空启4624western blot 转移缓冲液的配方? -
仲娟宇15068041456 ______ 转移缓冲液中不能含有sds的,sds会严重影响转印效果.

昌空启4624western 的步骤? -
仲娟宇15068041456 ______ 1)按厂商的使用指南用两块干净的玻璃,平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层,并固定在灌胶支架上. 2)按表7.1配制分离胶液体并脱气,然后加入10%的过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌混匀. 表7.1 聚丙烯酰胺分离胶的配制 ...

昌空启4624western常用的试剂和耗材有哪些,哪些公司比较好,并有哪些注意事项. -
仲娟宇15068041456 ______ 丙烯酰胺 、N,N'-亚甲双丙烯酰胺 、十二烷基硫酸钠 、Tris-HCL 、Tris、TEMED 、巯基乙醇 、甘氨酸 等 一抗是WB中最重要和最贵重的试剂,也是我们主要要推得产品. 主要品牌:Abcam(质量稳定,价格比较贵)、CST(质量稳定,价格...

昌空启4624WESTERN BLOT煮蛋白用得是几乘的loading buffer ,样品100ul, 5 乘的加多少? -
仲娟宇15068041456 ______ 一般用1乘的终浓度,那么: 1如果你最终样品溶液希望是100ul,那就是:样品+20(ul)5乘原液+80(ul)ddH2O 2如果你的样品已经有100ul,那就看你拿多大的管子来煮了.如果用2ml管子煮,最好配1ml终液,那就是:样品液(100ul)+200(ul)5乘原液+700(ul)ddH2O 总之,记住5乘原液的话是1:4的关系,即1份5乘原液+4份其他.

昌空启4624凝胶酶谱的SDS聚丙烯酰胺凝胶和western中的配制方法有什么区别? -
仲娟宇15068041456 ______ 凝胶酶谱的SDS-PAGE含0.1%明胶 配方: 分离胶 ddH2O 4.5ml 30%储备胶(0.8%甲叉+29.2%丙烯酰胺) 1.5mol/l Tris(PH 8.8) 10% SDS 10%过硫酸铵 TEMED 1%明胶(1g明胶-->100ml,37°C水浴溶解)0.5ml 浓缩胶 ddH2O 30%储备胶 1mol/...

昌空启4624印迹杂交Western是什?印迹杂交Western是什么
仲娟宇15068041456 ______ 在基因操作中,把DNA或RNA、蛋白质等在薄膜滤器上先经浸润,固定后,于薄膜滤... 等胶凝固后,去掉梳子和胶布,将盛胶槽放入1*MSE缓冲液的电泳槽.使RNA变...

昌空启4624dot blot,怎么加抗体 -
仲娟宇15068041456 ______ dot blot点完膜以后,就可以按照正常的WB流程,封闭,然后封闭液稀释一抗去孵膜了,没有特别大的差别.如果担心信号太强,可以稍微多稀释一点抗体.

昌空启4624western中Tris之前的5mM是什么单位 -
仲娟宇15068041456 ______ 浓度单位,5mM = 5mmol/L