western+blot电泳电压

HCP（Host Cell Proteins，宿主细胞蛋白）是指生物制品生产过程中，来自生产用细胞的蛋白质杂质。例如，当使用哺乳动物细胞（如CHO细胞）生产重组蛋白时，除了目标蛋白外，还可能有一些CHO细胞本身的蛋白存在于最终产品中。这些HCP可能会影响产品的稳定性、效力或安全性，因此需要进行检测和控制。

以下是HCP检测的常用方法及其原理：

1、ELISA (酶联免疫吸附测定法)

（1）原理：特异性抗HCP抗体被固定在酶标板上。待测样品中的HCP与抗体结合，然后再加入与HCP结合的酶标记的二抗。通过测定酶的活性，可以间接测量HCP的含量。

（2）优点：灵敏，可以量化HCP的总量。

（3）缺点：需要高质量的抗HCP抗体，可能不检测到所有的HCP杂质。

2、质谱法

（1）原理：利用质谱仪检测和鉴定样品中的蛋白质。

（2）优点：可以鉴定具体的HCP种类，高分辨率。

（3）缺点：技术要求高，成本较高，数据处理复杂。

3、免疫印迹 (Western Blot)

（1）原理：先通过凝胶电泳分离蛋白，然后将蛋白转移到膜上，并使用特异性抗HCP抗体检测目标HCP。

（2）优点：可以鉴定和定量特定的HCP。

（3）缺点：只能检测到与使用的抗体有反应的HCP。

4、二维凝胶电泳 (2D-PAGE)

（1）原理：通过两个方向的凝胶电泳分离蛋白，一维按等电点，二维按分子量，形成蛋白质的二维图谱。

（2）优点：可以观察到样品中所有蛋白的分布。

（3）缺点：技术要求高，不能直接量化。

在生物制品的开发和生产中，通常会结合多种方法来检测和控制HCP，以确保产品的质量和安全性。

丁钓刷3399请教western blot转膜的原理 -
林诗舍15562754744 ______ 原理: 1. 电场力作用条件下,带电粒子(PAGE胶中的蛋白)会发生定向迁移; 2. 蛋白大小如果超过膜孔径(0.22μm or 0.45μm),不会透过膜; 3. WB用的膜具有蛋白吸附作用;

丁钓刷3399Western blot实验需要准备什么试剂和耗材 -
林诗舍15562754744 ______ 试剂:tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tween 20、一抗、二抗、显色剂及SDS PAGE需要的试剂(tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N N 甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250)、预染蛋白Marker 耗材:滤纸、膜、乳胶手套等 仪器:电泳仪、电转槽、摇床、冰浴等

丁钓刷3399印迹杂交Western是什?印迹杂交Western是什么
林诗舍15562754744 ______ 在基因操作中,把DNA或RNA、蛋白质等在薄膜滤器上先经浸润,固定后,于薄膜滤... 与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot. Northern印迹杂交由...

丁钓刷3399蛋白质印迹法为什么叫Westernblot法? -
林诗舍15562754744 ______[答案] 一开始的时候是叫Southern blot的,后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个针对蛋白质,这两种技术分别被称为Northern和Western,才最终确定下来叫Westernblot法.通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质...

丁钓刷3399western blot转膜不用甲醇可以吗 -
林诗舍15562754744 ______ western blot转膜不用甲醇可以 蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot.它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法.其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色.通过分析着色的...

丁钓刷3399Westernblot中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么?
林诗舍15562754744 ______ 脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白.原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高.

丁钓刷3399western blot这个技术为什么不同人做出来的结果会相差那么远呢? -
林诗舍15562754744 ______ 与实验条件和每个人的实验习惯有关系.在操作规范,实验者素质较高的实验室western的结果可重复度还是很高的. 但是western毕竟是一个定性或半定量的实验,过程繁琐,中间的很多步骤很容易造成误差.从取样,到电泳上样,转膜,封闭,加抗体,显影,每一步都会有误差.

丁钓刷3399Western Blot都可以用beta - actin做内参吗? -
林诗舍15562754744 ______ 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin 做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用: 1、如果目的蛋白检测不...

丁钓刷3399凝胶酶谱和western blot的区别? -
林诗舍15562754744 ______ 主要是方法不同吧 酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的 MMP-2(基质金属蛋白酶-2)和MMP-9 恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶...

丁钓刷3399western blot等生物学试验中的内参是什么意思? -
林诗舍15562754744 ______[答案] western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那...