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大肠杆菌只有一条dna吗

来源:baiyundou.net   日期:2024-09-25

大肠杆菌转化可以:(1)将重组 DNA 分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制,增殖和表达, 以获得目的基因;(2)验证大肠杆菌感受态细胞效果;(3)用于分子生物学其他研究。

1 原理:

质粒 DNA 粘附在细菌细胞表面,经过 42°C 短时间的热击处理,促进吸收 DNA.然后在非 选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生 长。

2 器材:

旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,干 式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体 LB-Amp),超 净工作台,酒精灯,玻璃涂棒,恒温培养箱。

3 材料和试剂:

质粒 DNA,重组 DNA,培养基(不加抗菌素),LB 培养基(加抗菌素),无菌 ddH2O, IPTG,X-gal。

4 实验准备:

无菌 ddH2O,1.5ml  离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌),20%IPTG(M/V),2% X-gal(M/V,用 N,N-二甲基甲酰胺配)。

5 操作步骤:

(1)事先将恒温水浴的温度调到 42℃。

(2)从-70℃ 超低温冰柜中取出一管(100μl)感受态菌,立即用手指加温融化后插入冰 上,冰浴 5~10min。

(3) 加入 5μl 连接好的质粒混合液(DNA 含量不超过 100ng),轻轻震荡后放置冰上20min。

(4)轻轻摇匀后插入 42℃水浴中 1~2min 进行热休克,然后迅速放回冰中,静置 3~5min。

(5) 在超净工作台中向上述各管中分别加入 500μl LB 培养基(不含抗菌素)轻轻混匀, 然后固定到摇床的弹簧架上 37℃震荡 1h.

(6) 在超净工作台中取上述转化混合液 100~300μl,分别滴到含合适抗菌素的固体 LB 平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍 等片刻,待其冷却后再涂)。

(7)如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加 40μl 2% X-gal, 8μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。

(8) 在涂好的培养皿上做上标记,先放置在 37℃恒温培养箱中 30-60min 直到表面的液 体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入 37℃恒温培养箱过夜。

(9)  在被细菌污染的桌面上喷洒 70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。

(10)观察平板上长出的菌落克隆,以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。

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令彦空1693下图一是真核细胞DNA复制过程的模式图,图二是大肠杆菌DNA复制过程模式图,箭头表示复制方向.对此描述错误的是 -
艾荣荷18636894055 ______[选项] A. 真核细胞DNA有多个复制起点,而大肠杆菌只有一个 B. 两者均具有双向复制的特点 C. 真核细胞DNA复制时,在起点处不都是同时开始的 D. 两者的遗传物质均是环状的

令彦空1693在表格中如何区别显性基因和隐性基因 -
艾荣荷18636894055 ______ 根据表格中双亲性状与子代性状,如果双亲性状相同子代出现了不同的性状,则双亲的性状为显性;如果双亲性状不相同,但所有子代的性状均相同,则子代的性状为显性.只有这两种情况能帮助判断显隐性.

令彦空1693显性基因和隐性基因在结合时为什么显性基因的性状会变现出来? -
艾荣荷18636894055 ______ 显性和隐性是根据自然规律人为定义的,不是说“因为是显性所以表现出来”,而是“因为表现出来,所以称为显性” 具有相对性状的2纯和亲本杂交,F1表现的性状为显性性状,F1不表现的性状为隐性性状 性状的表现是相应基因表达的结果 基因通过控制酶的合成来控制代谢过程,进而控制生物体的性状 基因通过控制蛋白质的合成直接控制生物性状

令彦空1693大肠杆菌与普通动植物细胞的结构有什么不同 -
艾荣荷18636894055 ______ 1.大肠杆菌没有真正完整的细胞核,只有一个拟核而且拟核外没有核膜包围2.大肠杆菌的拟核是一个裸露的环状DNA分子,没有与蛋白质形成染色体结构3.大肠杆菌的细胞器只有游离的核糖体,没有其他复杂的细胞器(如线粒体、叶绿体、内质网、溶酶体、高尔基体、中心体.)4.大肠杆菌的细胞壁成分主要为肽聚糖(而植物的细胞壁主要成分为纤维素和果胶)

令彦空1693大肠杆菌如何复制基因组?注意,是基因组哦 -
艾荣荷18636894055 ______ 标准的大肠杆菌是4M的基因组.大概的复制情况如下: 大肠杆菌染色体DNA的复制 大肠杆菌染色体DNA的复制是从染色体的一个特定位置,即复制起始区(oriC)开始的双向复制,在环状染色体的相对位置上的终止区(terC)终止.整个复制...

令彦空1693生物问题 -
艾荣荷18636894055 ______ 第一个问题中,问的是含14N的DNA细胞占总细胞数,第一个细胞的DNA虽然被15N标记,但他分裂时,复制...

令彦空1693细菌体内的遗传物质有哪两种 -
艾荣荷18636894055 ______[答案] 一、细菌染色体 细菌作为原核型微生物,虽没有完整的核结构,但却有核区(或核质).在电镜下观察,核区有盘旋堆积的DNA纤维.自大肠杆菌提取的DNA是一条完整的DNA链,分子量为 2.4*109daltons,仅为人体胞DNA量的0.1%.细胞的DNA含量...

令彦空1693细菌的遗传性是指什么? -
艾荣荷18636894055 ______ 一、细菌染色体 细菌作为原核型微生物,虽没有完整的核结构,但却有核区(或核质).在电镜下观察,核区有盘旋堆积的DNA纤维.自大肠杆菌提取的DNA是一条完整的DNA链,分子量为 2.4*109daltons,仅为人体胞DNA量的0.1%.细胞的...

(编辑:自媒体)
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