大肠杆菌的dna复制过程

大肠杆菌转化可以：（1）将重组 DNA 分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达， 以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。

1 原理：

质粒 DNA 粘附在细菌细胞表面，经过 42°C 短时间的热击处理，促进吸收 DNA.然后在非 选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生 长。

2 器材：

旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干 式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体 LB-Amp），超 净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。

3 材料和试剂：

质粒 DNA，重组 DNA，培养基（不加抗菌素），LB 培养基（加抗菌素），无菌 ddH2O， IPTG，X-gal。

4 实验准备：

无菌 ddH2O，1.5ml  离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用 N,N-二甲基甲酰胺配）。

5 操作步骤：

（1）事先将恒温水浴的温度调到 42℃。

（2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰 上，冰浴 5~10min。

（3） 加入 5μl 连接好的质粒混合液（DNA 含量不超过 100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。

（4）轻轻摇匀后插入 42℃水浴中 1~2min 进行热休克，然后迅速放回冰中，静置 3~5min。

（5） 在超净工作台中向上述各管中分别加入 500μl LB 培养基（不含抗菌素）轻轻混匀， 然后固定到摇床的弹簧架上 37℃震荡 1h.

（6） 在超净工作台中取上述转化混合液 100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体 LB 平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍 等片刻，待其冷却后再涂）。

（7）如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加 40μl 2% X-gal， 8μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。

（8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在 37℃恒温培养箱中 30-60min 直到表面的液 体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入 37℃恒温培养箱过夜。

（9）  在被细菌污染的桌面上喷洒 70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。

（10）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。

伏罗俗1803大肠杆菌的DNA复制到底要不要 解旋酶 如果需要 怎么解释下题中的第二问 它没加解旋酶啊 怎么会能复制出呢为了探究DNA的复制、转录等过程,科学家做... -
宣狭界17686174757 ______[答案] 第一问:缺少的是DNA引物.就解旋酶而言,我感觉本题探究不在这,其复制过程中需要解旋酶.

伏罗俗1803DNA的复制过程有哪几步 -
宣狭界17686174757 ______[答案] DNA复制过程 以原核生物DNA复制过程予以简要说明 1.DNA双螺旋的解旋 DNA在复制时,其双链首先解开,形成复制叉,而复制叉的形成则是由多种蛋白质及酶参与的较复杂的复制过程 (1)单链DNA结合蛋白(single—stranded DNA binding ...

伏罗俗1803科学家以大肠杆菌为实验对象,运用同位素示踪技术和密度梯度离心的方法,对DNA的复制方式进行研究.实验过程及结果如表所示.请回答问题: 培养方法 ... -
宣狭界17686174757 ______[答案] (1)DNA分子实际是半保留复制,则第二步实验结果因该只有中带(14N/15N);第三步中子代DNA经离心后应该12中带(14N/15N),12轻带(14N/14N).(2)如果在第三步结果的基础上继续培养,使大肠杆菌再分裂一次,应...

伏罗俗1803...(4)为了研究大肠杆菌的DNA复制是单起点复制还是多起点复制,用第(2)题的方法观察到的大肠杆菌DNA复制过程如图丁所示,这一结果说明大肠杆菌细... -
宣狭界17686174757 ______[答案] (1)(规则)双螺旋 复制起点数量 (2)如下图 (3)DNA复制是双向的 (4)单 (1)因为DNA复制开始时必须先解旋,从而在复制起点位置形成复制叉,所以可以根据...

伏罗俗1803在生物界DNA合成的方式有几种?大肠杆菌及其真核生物中有哪些DNA聚合酶及它们各有何功能? -
宣狭界17686174757 ______ 两种 第一种是DNA自我复制 即:以一条DNA为母链按碱基互补配对原则合成子代DNA的过程 第二种是以RNA为模板的逆转录 1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又...

伏罗俗1803为了探究DNA的复制、转录等过程,为了探究DNA是复制.转录等过程,科学家做了如下系列实验:实验一:将大肠杆菌中提取出的DNA聚合酶加到具有足量... -
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伏罗俗1803为了探究DNA的复制、转录等过程,有人做了一系列的实验:实验一:将大肠杆菌中提取出的DNA聚合酶加到具有足量的四种脱氧核苷酸的试管中.在适宜... -
宣狭界17686174757 ______[答案] (1)由于在实验一中只有DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸,没有DNA模板和ATP等,所以在适宜温度条件下培养一段时间后,不能测定出DNA. (2)由于枯草杆菌、大肠杆菌、小牛胸腺细胞、T2噬菌体的DNA具有不同的遗传信息,脱氧核苷酸的含量和种...

伏罗俗1803细胞如何修复受损的DNA -
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伏罗俗1803大肠杆菌的生长周期是多少? -
宣狭界17686174757 ______ 我们知道大肠杆菌分解葡萄糖的酶是组成酶,分解乳糖的酶是诱导酶,当葡萄糖被消耗完毕以后,才能合成分解乳糖的酶.那么将大肠杆菌培养在以有限的葡萄糖和大量乳糖作为碳源的培养液中.我们得到的生长曲线是: 数| . 量| . | . | . ——————时间分析:利用葡萄糖,增长速率加快---葡萄糖逐渐消耗,开始诱导合成分解乳糖的酶,增长速率减慢---分解乳糖的酶生成,利用乳糖,增长速率有加快----乳糖消耗,增长速率减慢