小型质粒提取试剂盒

柱式质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，离心吸附柱内的硅基质膜在

高盐、低 pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，并最大限度的去除蛋白质、基因

组 DNA、RNA 和其他杂质，最后在低盐、高 pH 的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质

膜上洗脱，每个吸附柱可吸附高达 50μg 的质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15℃保存，干冰运输；

其他组分 15 ~ 25℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-15 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 1 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 500 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，混匀至无菌块。

3、向离心管中加入 500 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 700 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液分批转移到已装入收集管的吸附柱中，12000 rpm 离心 1 min，倒掉

收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：一根吸附柱最大容积为 750 uL，请分两次转移上清液到吸附柱中。

6、向吸附柱中加入 500 μL Buffer PD，12000 rpm 离心 1 min，弃废液。

7、向吸附柱中加入 600 μL Buffer PW（使用前请确认是否加入无水乙醇），12000 rpm 离心

1 min，弃废液。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2-5 min，有助于更好的去除杂质。

8、重复一次步骤 7。

9、将吸附柱重新放回收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，目的是去除吸附柱中残余的漂洗液。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，确保乙醇挥发干净。

10、将吸附柱放到一个干净灭菌 1.5 mL 离心管中，将吸附柱开盖静置数分钟。向吸附膜中

间位置悬空滴加 50-100 µL Buffer TE 或 ddH2O（可提前放在 55 - 65 ℃水浴锅中预热，提高

质粒 DNA 回收率），室温放置 2 min。12,000 rpm ，离心 2 min 收集质粒 DNA 溶液（若需

要获得最高产量，建议将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复第 10 步进行二次洗脱。）。

11、质粒溶液保存在- 20℃。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

3、若低温保存时，Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室

温放置一段时间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

4、Buffer PD 可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为 endA+（TG1、BL21、HB101、ET12567、

JM 系列）等核酸酶含量较高的菌株时，必须使用 Buffer PD。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：乙醇。

甄邢夜3698Axygen公司的质粒DNA小提试剂盒从1 - 4mL菌液中一般能提取几ug的质粒? -
宓帘瑞17848544236 ______ 1-2ug左右吧 如果拷贝数低的质粒也可能不到1ug 4ml的话

甄邢夜3698做稳定转染选择何种质粒提取试剂盒
宓帘瑞17848544236 ______ 您的情况我们去年也曾遇到过.目前市面上的质粒提取试剂盒林林总总,令人难以取舍.我觉得首先应该根据自己的需要来选取.进口的试剂盒,比如 qiagene,omiga,promega等固然好,但是价格较贵,如果自己的实验要求不是很高的话,用这...

甄邢夜3698同科生物无内毒素质粒小量提取试剂盒有什么特点? -
宓帘瑞17848544236 ______ 无内毒素质粒提取试剂盒在常温(15-25℃) 干燥条件下可保存12个月.RNase A(核糖核酸酶)在2~8℃可保存12个月.

甄邢夜3698高纯度质粒中量快速提取试剂盒(离心柱型)怎么样,求推荐!! -
宓帘瑞17848544236 ______ 博凌科为的高纯度质粒中量快速提取试剂盒(离心柱型)很不错啊 本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法和硅基质膜吸附技术大规模的制备质粒,获得产量高.每次处理100-200ml菌液.获得的质粒DNA产量高,纯度好,可直接用于酶切、转化、...

甄邢夜3698mini prep是什么意思 -
宓帘瑞17848544236 ______ miniprep是一种小量抽提质粒DNA的方法,Qiagen公司也有一套质粒小抽试剂盒的名称是miniprep.

甄邢夜3698我们院里要进质粒提取试剂盒?求助 -
宓帘瑞17848544236 ______ 常规的使用小提试剂盒提取得到的质粒,并不适合用来转染细胞,其原因在于:1.小提质粒浓度较低,一般仅为0.1~0.2ug/ul.而用质粒转染细胞,一般至少需要2~5ug左右,如果使用小提质粒,只能加大上样量,这样对转染操作会有一定影响.2.小提质粒纯度不够,且内毒素含量较高,会对目的细胞有一定毒性,影响转染效率.基于以上原因,如果提取的质粒在用质粒转染目的细胞时,可以选择长沙赢润生物技术有限公司的质粒大量提取试剂盒.

甄邢夜3698那位大侠知道,为什么提不出质粒来,我是严格按照说明上的步骤进行的,用的是拜尔迪的小提试剂盒?同样的试剂盒第一次提出来过,这是第二次,我做... -
宓帘瑞17848544236 ______[答案] 之前用时是不是P2没有及时盖紧盖子,在空气中酸化了

甄邢夜3698biospin 质粒DNA小量提取试剂盒中有瓶试剂叫wash buffer,需要加入无水乙醇,请问加入无水乙醇的作用是什么?今天做胶回收的时候不小心选择了没有加... -
宓帘瑞17848544236 ______[答案] 1.wash buffer中加入无水乙醇后,终浓度差不多就是70%的乙醇溶液了,在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响... kb大小的片断,就没有办法再被PDS共沉淀了.所以碱处理的时间要短,而且不得激烈振荡,不然最后得到的质粒上总会有大量...

甄邢夜3698刚活化后 提取的质粒(小量试剂盒提取法) 电泳图为什么会出现2、3条带?这是中间载体的质粒,马上要酶切 之后链接,之前是因为没有链接成功,所以怀... -
宓帘瑞17848544236 ______[答案] 这是很正常的,质粒提取过程中或多或少会对质粒本身造成一定的损伤,根据损伤的不同,质粒通常会出现三种不同的构型,分别是双链环状,线性分子(机械损伤造成质粒链完全断开)和单链开环(双链中只有一条链断开,另外一条是闭合的)....

甄邢夜3698SDS碱裂解法质粒DNA小量提取最近在做质粒DNA的提取,做到最后,加入TE还有不容的沉淀,请高手指导一二, -
宓帘瑞17848544236 ______[答案] 不知道你是手提还是试剂盒提质粒,试剂盒我没碰到过这样的状况,如果是手提,一般考虑蛋白没有除干净,如果电泳质粒没有问题,不用去管,如果后续实验对质粒要求较高,可以考虑再次除蛋白,但是质粒也会损失,或者重提质粒时,将除蛋白...