流式细胞检测步骤
可以对流式细胞术进行配置，以分析比血细胞或精子大得多的分子，并进行计数或分类以外的工作。CytoBuoy b.v.(荷兰武尔登)专门生产用于对海洋和湖泊中所有类型颗粒(例如，浮游生物、微塑料)进行计数、形状分析和成像的仪器。他们对紧凑型多波长仪器的需求越来越大，这种仪器可以漂浮或浸没在海中，长时间无需看管。
解决方案
其 CytoSense 仪器结合了 1 mm2 的大流通池来支持大颗粒检测，以及一个光学系统，该系统可在整个流动流的宽度上产生均匀(平顶)的激光轮廓。这使得用户可以同时检测到非常小的物种(如原绿球藻)，而不依赖于它们在水流中位置的小偏差。CytoBuoy 方法的另一个独特之处是，每个检测器信号的快速数字化。对于以 2 m/s 速度流过锐利激光焦点的粒子，典型 4 MHz 检测器速度会转化为每 0.5 微米一个数据点，从而实现成像和形状确定。
所有仪器都使用 488 nm 波长，这是激发浮游植物自发荧光的最佳波长。此外，还通常使用波长为 405、445、532、594 或 637 nm 的第二个激光器。CytoBuoy 使用 OBIS 激光器，因为这些激光器都具有相同的外形规格和功能，不受波长影响，简化了仪器设计。
结果
CytoBuoy 首席执行官 George Dubelaar 解释道，“对我们的许多客户来说，几个月的自主操作至关重要。因此，我们一直在努力提高可靠性并延长维护周期。OBIS 激光器可以满足我们的所有需求。这些激光器外形紧凑，可靠性高，节能，热预算低;整个仪器必须依靠浮标太阳能电池板的电源运行”。CytoSense 仪器还用于生物过程监测和生物医学分析。
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花骂往2219细胞内细胞因子的流式细胞怎样检测?
米晴湛17246619735 ______ 胞内流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合,即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌,同时采用特殊的化学与抗体选择,确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景.具有其它方法难以比拟的优点: 快速:流...
花骂往2219流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备 -
米晴湛17246619735 ______ 根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起.(1)细胞培养 取对数...
花骂往2219用流式细胞仪怎么检测MICA/B的表达 -
米晴湛17246619735 ______ MICA/B为膜蛋白,可以做活细胞的检测.细胞分为2组.第一组先用抗MICA/B抗体孵育,洗脱,再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.第二组用非特异性抗体(和抗MICA/B抗体同型),洗脱.再用荧光二抗识别,洗脱.上机检测.荧光阈值按照第二组设置.第一组超过阈值的部分为阳性细胞.
花骂往2219如何进行Caspase - 3活性的流式细胞术检测 -
米晴湛17246619735 ______ 目前有专用的试剂: 荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入.进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA. 流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的.荧光强度越高,酶的活性越强. 这个试剂 life technology出的 CellEvent® Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit
花骂往2219流式检测细胞周期都有哪些染色方法 -
米晴湛17246619735 ______ 从分类上来说,一般有两类:第一类是只染DNA.这类方法比较简单,用酒精固定细胞后,直接加含有RNA酶的荧光染料,比如PI等,然后就可以直接上机. 第二类另外加了一个步骤,在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物,比如BrdU或者EdU.细胞新合成的DNA上就会有这些物质.在不同时间点收集细胞,用DNA染料染DNA的同时,还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光.这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样,看到处于细胞周期各个期的百分率,另外还可以看到有多少DNA是新合成的.是一个动态的过程.
花骂往2219如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量 -
米晴湛17246619735 ______ 可以.这个是流式细胞仪一个常见的应用. 上流式细胞仪以前,需注意的是 1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用. 2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足...
花骂往2219流式细胞仪检测淋巴细胞因子时抗体怎么加 -
米晴湛17246619735 ______ 流式检测细胞因子,有两种做法:第一种是检测细胞内的,需要固定和通透细胞膜,然后加抗体染色,在洗去未结合的抗体 另外一种是荧光小珠为基础的,检测溶液内细胞因子.可以同时检测一个系列.小珠按照荧光种类和强弱的不同,表面事先固定好了相应的抗体.和样本混合后,在加入另外一种荧光标记的抗体.结果看起来就是下面这个图:
花骂往2219Annexin Ⅴ - FITC/PI能否用于测定细胞周期 -
米晴湛17246619735 ______ Annexin V-FITC/PI是用来测细胞凋亡的,测细胞周期可以用其中的PI,但用Annexin V-FITC/PI来测细胞周期比较浪费试剂.测细胞周期的大致步骤如下:1. 收集1 x106个细胞,1500rpm离心5 min,弃上清.同样离心条件下,用4℃预冷的PBS洗...
花骂往2219流式细胞仪如何测免疫球蛋白
米晴湛17246619735 ______ 流式细胞仪不能检测游离的Ig,但是如果细胞表面结合有IgG或者IgM等免疫球蛋白,则这些免疫球蛋白可以被抗免疫球蛋白的抗体识别.如果这些二抗被荧光染料标记,就可以用流式细胞仪来检测细胞表面是否有免疫球蛋白附着了.
花骂往2219如何用流式细胞仪检测转染细胞的效率? -
米晴湛17246619735 ______ 阴性对照最好用转染无GFP载体的细胞,因为转染可能会改变细胞的自发荧光本地 确保阴性对照和实验细胞的浓度相同,具体多少倒是无所谓,不要太稀释就好 上机前,用细胞滤网过滤掉大块未消化的杂质 不要固定,GFP固定后荧光强度会下降.