玻璃匀浆器
为研究不同葡萄糖酸铬添加量对锦鲤血清中激素水平和肝胰脏中、糖代谢相关酶活性的影响。
选择初始体质量为(4.18+0.38)g的锦鲤525尾，随机分为7组，每组设3个重复，每个重复放25尾鱼，投饲养殖周期为8周｡
饲料中C添加量=0.2mg/kg时，能显著提高锦鲤肝胰脏中葡萄糖激酶(GK)活性(P<0.05)，显著降低葡萄-6-磷酸酶(G6)活性(P<0.05)。
Cr添加量为0.1~1.6mg/kg时，能显著提高丙酮酸激酶(PK)活性(P<0.05)，显著降低磷酸烯醇式丙酮酸羚基酶(PEPCK)活性(P<0.05)。
Cr添加量为0.4~0.8mg/kg时，能显著提高葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性，Cr添加量=0.8mg/kg时，琥珀酸脱氢酶(SDH)活性显著升高(P<0.05)。
除Cr添加量为3.2mg/kg组锦鲤苹果酸脱氢酶(MDH)活性显著高于对照组(P<0.05)外，其余各组间均无显著性差异(P>0.05)｡
研究表明，饲料中添加葡萄糖酸铬可有效提高锦鲤对饲料中糖类物质的利用能力，建议饲料中Cr的适宜添加量为0.8mg/kg｡
●—≺ 试验与方法 ≻—●
锦鲤因其体色艳丽、易于饲养而广受消费者欢迎｡
目前，有关Cr作为锦鲤饲料添加剂的研究报道较少，本试验前期曾研究了不同葡萄糖酸铬含量对锦鲤生长、血液和抗氧化指标的影响。
但对于葡萄糖酸铬影响其糖利用能力等方面的研究尚未见报道｡为此，本试验中在前期研究的基础上探讨了不同葡萄糖酸铬含量对锦鲤部分激素水平和糖代谢酶活性的影响。
旨在为进一步验证葡萄糖酸铬可否作为锦鲤配合饲料添加剂来使用提供基础依据｡
本试验中，以水产有限责任公司提供的天祥585饲料为底料(蛋白质含量32%，脂肪含量5%)。
配制7种不同葡萄糖酸铬含量的试验饲料，添加量分别为0(对照)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg/kg(以Cr+计)｡
饲料中采用原子吸收光谱法(石墨炉原子化法)测定Cr+含量，实测值分别为074、0.86、0.951.15、1.59、2.40、4.01mg/kg｡
葡萄糖酸有效含量为97.87%，Cr3+含量为8%｡饲料底料经多功能粉碎机粉碎后，用制粒机挤压成直径为1.5mm的颗粒料，在烘箱(DK400，YAMATO)(40C)中烘干2h，取出后自然风干至水分约12%，于冰箱(-20°C)中保存备用｡
待试验鱼适应养殖环境后，选取大小基本一致、初始体质量为(4.18+0.38)g的健康试验鱼525尾随机分为7组，每组设3个重复，每个重复25尾鱼｡
饲养周期为8周1.2.2样品采集8周饲养试验结束后，试验鱼禁食24h，用MS-222(40mg/L)将鱼麻醉后，每槽随机选取20尾试验鱼并从尾部采血，于4下以4000r/min离心5min，取上清液｡
取血后的试验鱼迅速于冰盘上解剖取其肝胰脏，取出后用4℃去离子水冲净，并按质量与体积比为1：9加入预冷的双蒸水，使用玻璃匀浆器制成体积分数为10%的组织匀浆液。
取上清液于4C下以3000r/min离心10min｡所有样品处理后均转入超低温冰箱(-80℃)中保存备用｡
●—≺ 结果与分析 ≻—●
从表1可见：在饲料中添加Cr3+后能显著降低锦鲤血清皮质醇含量(P<0.05)。
胰岛素水平随Cr+添加量的增加呈先升高后降低的趋势，最高值出现在Cr+添加量为0.8mg/kg组，其他各组间均无显著性差异(P>0.05)。
胰岛素受体水平在Cr添加量=0.4mg/kg时显著高于对照组及0.1mg/kg组(P<0.05)。
从表2可见：GK活性在Cr3+添加量为0.2~3.2mg/kg时均显著高于对照组(P<0.05)，最高值出现在0.8mg/kg组，显著高于其他各组(P<0.05)。
PK活性除Cr3添加量为3.2mg/g组外其他Cr3+添加组均显著高于对照组(P<0.05)。
添加葡萄糖酸铬后，各组试验鱼G6P活性均低于对照组，Cr3+添加量=0.2mg/kg时，各添加组G6P活性均显著低于对照组(P<0.05)。
G6PDH活性随葡萄糖酸铬添加量的增加呈先升高后降低的趋势。
除Cr3添加量为3.2mg/kg组MDH活性显著高于对照组(P<0.05)外，其余Cr3添加组MDH活性均与对照组无显著性差异(P>0.05)｡
●—≺ 讨论 ≻—●
Cr+通过增强胰岛素的作用进而发挥其生物学功能。
补铬能有效降低血清中胰岛素水平，推测其原因可能是铬以活性形式增强机体胰岛素的内化率，促进骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取，使得血液循环中胰岛素和血糖含量降低。
结果显示，适量吡啶羧酸铬能显著提高草鱼血清胰岛素水平，在饲料中添加葡萄糖酸铬后，试验鱼血清胰岛素水平均有所升高。
其中Cr3+添加量为0.8mg/kg组的试验鱼血清胰岛素水平最高且显著高于对照组，证实了铬作为胰岛素辅因子来协同胰岛素功能的生理学作用｡
有研究报道，Cr3+是通过增加胰岛素受体数量或促进胰岛素和细胞膜上的受体IR结合，从而提高细胞对葡萄糖敏感性。
本试验中，在饲料中添加了葡萄糖酸铬后，锦鲤血清皮质醇含量均显著降低，说明葡萄糖酸铬对提高锦鲤抗应激作用具有明显效果。
此外，本试验中锦鲤胰岛素水平与皮质醇含量呈反向相关这一结果，反映出典型的胰岛素(合成代谢)与皮质醇(分解代谢)间的代谢关系｡
糖酵解是葡萄糖分解产生能量的一个重要过程，而葡萄糖激酶和丙酮酸激酶是糖酵解途径中重要的限速酶｡
GK也被称为IV型己糖激酶，是糖酵解过程中的第一个限速酶，催化葡萄糖磷酸化生成G6P｡
当机体GK缺乏或活性较低时，会导致鱼体对饲料中糖的利用能力降低｡
PK催化的反应是葡萄糖生成丙酮酸的最后一步反应，即催化磷酸烯醇式丙酮酸转化成丙酮酸｡
而本试验中在饲料中添加葡萄糖酸铬后均能诱导锦鲤肝胰脏GK和PK活性增强，说明葡萄糖酸铬具有促进锦鲤糖酵解过程的作用｡
PEPCK催化糖异生作用的第一步，将草酷乙酸盐转变成磷酸烯醇式丙酮酸盐，对能量代谢具有重要的意义。
G6P则催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，这一反应是糖异生作用对糖酵解的不可逆作用的一种迁回方式。
铬通过在动物体内形成核酸衍生物，进而直接抑制PEPCK活性，胰岛素自身通过抑制其PEPCK的表达，从而抑制PEPCK活性，铬的补充能够通过加强胰岛素作用，进一步间接抑制PEP-CK活性｡
本试验中，在Cr+添加量=0.2mg/kg时，锦鲤G6P和PEPCK活性均有显著降低，与上述研究相类似｡此外，乔伟29对大鼠的研究也发现类似结果｡
磷酸成糖途径是机体糖分解代谢的另一条重要途径，此过程能够提供大量烟酷胺腺漂吟二核首酸磷酸(NADPH)，参与机体许多代谢反应｡
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是磷酸成糖途径的关键酶，它促使磷酸戊糖核酸、NADPH的合成反应并维持细胞的氧化还原状态｡
本试验中，在饲料中Cr3添加量为0.4~0.8mg/kg时能显著提高G6PDH活性｡
在饲料中添加吡啶羧酸铬2mg/kg时未对其G6PDH活性产生显著影响，其原因可能与试验对象、所用铬源、铬离子添加水平、饲料糖源及养殖条件不同有关｡
三羚酸循环是需氧生物体内普遍存在的代谢途径，苹果酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶是三羚酸循环中的重要脱氢酶｡
有研究表明，补充吡啶羧酸铬能有效提高肉鸡和猪的MDH活性，从而对糖代谢进行调控。
而对于鱼类而言，在饲料中添加此吡啶羧酸铬未对罗非鱼MDH活性产生显著影响｡
本试验与上述结果相类似，在饲料中添加葡萄糖酸铬未对锦鲤肝胰脏中MDH活性产生显著影响｡
铬是琥珀酸-细胞色素脱氢酶、葡萄糖磷酸变位酶等酶系的必需微量元素，它参与机体糖、脂代谢过程｡
在日粮中添加铬能显著提高三羚酸循环途径中SDH活性，促进机体葡萄糖分解供能｡
本试验结果显示，Cr3添加量≥0.8mg/g时，锦鲤肝胰脏SDH活性显著升高，此结果与上述研究结果相一致｡
●—≺ 结语 ≻—●
葡萄糖酸铬能够提高锦鲤胰岛素和胰岛素受体水平，降低皮质醇含量。
同时，还能诱导糖酵解途径、磷酸戊糖途径和三羚酸循环途径酶活性，抑制糖异生途径酶活性，从而提高自身糖利用能力，建议锦鲤饲料中葡萄糖铬添加量为0.8mg/kg(以Cr计)｡
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