菌种传代

我们做微生物实验的时候，常用平板接种菌落，经常会遇到在给平板接种菌之后却没有菌落生长的情况。今天，我们来分析一下出现这种情况的原因。本文将从菌种、人员操作、培养基和添加剂三个方面来分析。

一、菌种原因

1，菌种老化：菌种如果经过连续频繁的传代达十几次甚至几十次，就会造成菌种老化，岀现生长缓慢甚至不生长的情况。

2，野生菌种：相比于标准菌株，有一些野生分离的菌种本身比较脆弱，对营养要求比较高，对外界不良环境也比较敏感，难以在普通的平板上生长，往往需要加入特殊的营养物质。

3，菌种没有进行充分活化：当我们拿到一株菌的时候，该菌种往往是处于一个保藏状态的，这就需要我们通过合适的培养基来逐代扩大培养，得到活力旺盛的菌株，所以充分活化的目的就是要让菌种逐渐适应培养环境，从而在平板上快速生长。

4，样品中的菌：有的样品中本身含菌量就较少，如水样、供试液等，接种量低造成平板上无菌生长。还有的样品中含有一些抑菌成分，会杀死样品中的菌，导致无菌落生长。

5，购买的商品化菌株：有一些商品化的菌株，如益生菌、菌肥、可食用真菌等，本身进行过基因改造，不能进行连续传代扩大培养，故在平板上难以生长。

二、人员操作不当

1、容器未洗刷干净，残留的抑菌成分导致菌不生长。

2、培养基配置过程中称量错误，加入添加剂比例错误等。

3、过度灭菌，有很多培养基成分不耐高温，过度灭菌会导致成分失效。

4、调pH值错误，不同温度下培养基的pH值也会不一样，未正确的调配pH值，也会导致菌不生长。

5、在实验操作过程中失误，特别是在稀释菌液过程中少接或者错接菌。

6、未放置合适的培养条件，根据不同菌对氧气的需求程度，可以分为需氧、厌氧、微需氧培养等。根据不同菌对温度的需求，又可以在25°C、30°C、35°C、42°C、56°C等不同温度下培养。

三、培养基及添加剂原因

1、成品培养基本身质量不好，如原材料纯度不高、含有抑菌成分、原材料之间配比错误等都会导致成品培养基不合格。

2、特殊培养基及添加剂未正确存放，未遮光、冷藏、严格密封保存等导致失效。

3、培养基及添加剂超过有效期或者临近有限期，营养成分存在一定程度的失效导致菌不生长。

4、培养基及添加剂营养不够或者不适合培养某类菌种。有一些菌种本身营养要求比较特殊，需要添加某些特殊营养后方能生长。

5、培养基pH值发生改变，有一些特殊的成品培养基pH值随时间会存在一定程度的改变，在使用前需要对pH值重新进行调整，否则也会导致菌不生长。

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