过硅胶柱

DNA 凝胶回收试剂盒

产品简介：

DNA 凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit)，是一种用于从 DNA琼脂糖凝胶中回收目的 DNA 的试剂盒。本试剂盒采用优化的缓冲体系和可高效、专一性吸附 DNA 的硅胶柱，从 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段，通过离心力或者负压让含有核酸的溶液通过硅胶膜，使核酸在特定溶液环境中吸附在硅胶膜上，经过洗涤、洗脱等步骤得到纯的核酸。纯化的 DNA 可直接用于连接、转化、酶切、PCR、 测序、文库筛选等分子生物学研究。

产品内容：

储存条件：

使用前请先在漂洗液 Buffer PW 中加入 12 mL 无水乙醇。

１．将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取凝胶重量（去除空管重量），100 mg凝胶等同于 100 μL 体积，作为一个凝胶体积。

注：若回收的 DNA 片段用于克隆，须避免紫外照射损伤 DNA。尽量减少紫外暴露时间。

２．向胶块中加入 1 倍体积 Buffer PE（如果凝胶重为 0.1 g，则加入100 µL Buffer PE）。50-60℃水浴溶胶 5-10 min，期间温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块。）

３．将上一步所得溶液加入一个吸附柱中，室温放置 1 min，12,000rpm 离心 1 min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

注：吸附柱的容量为 750 µL，若上步得到的溶液大于 750 µL，可分批加入。

４．在吸附柱中加入 300 µL Buffer PE，12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

５．在吸附柱中加入 700 µL Buffer PW（确认已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

６．重复一次步骤 5。

７．吸附柱放回收集管后，12,000 rpm 离心 2 min，尽量除尽漂洗液。

注意：可将吸附柱置于室温放置数分钟，以防止残留的乙醇影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

８．将吸附柱放入干净的 1.5 mL 离心管中，开盖室温静置 5 min。向吸附膜中间位置加入 30 µL Buffer PB 或 ddH2O（洗脱液应先放置于水浴锅中预热） ，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 2 min，收集DNA 溶液。

注意：洗脱体积不应小于 30 μl，体积过少影响回收效率。为了提高 DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，12,000 rpm 离心 2 min，将DNA 溶液收集到离心管中。回收大于 3 KB 的片段时，建议将 Buffer PB 预热至55 ℃以提升回收效率。DNA 也可以用 ddH2O 洗脱。DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

黄泉鬼4593过柱子,化合物无色,在硅胶柱上变蓝,什么原因 -
山刮超13829677744 ______ 拌样也只是为了将样品转移到柱子上,用粗硅胶的目的只是为了转移样品.若用了细硅胶,有一定的分离效果,可能会形成交叉.

黄泉鬼4593硅胶柱层析的硅胶柱层析惯用方法 -
山刮超13829677744 ______ 1.称量.200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以. 2.搅成匀浆.加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌.如果洗脱剂是石油醚...

黄泉鬼4593硅胶柱色谱的洗脱顺序
山刮超13829677744 ______ 由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱.正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.

黄泉鬼4593【求助】这个化合物在紫外灯下怎么显色? -
山刮超13829677744 ______ 他们在紫外灯下都不显色,过柱会吸收紫外线吗?会出峰吗? 一边过柱一边点板碘熏,应该可以的.zhangmkudi(站内联系TA)上面的同学也说了,你可以通过柱层析的方法分离,还有一种方法就是选择合适的展开剂淋洗第一个点,然后选择...

黄泉鬼4593硅胶柱的原理?硅胶柱中 硅胶的作用是什么?是吸附还是分子筛啊 -
山刮超13829677744 ______[答案] 硅胶层析法的分离原理是:根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离,一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程. 也就是说,利用吸附的特性起分子筛的作用.

黄泉鬼4593葡聚糖凝胶柱层析和硅胶柱层析的区别 -
山刮超13829677744 ______ 这个葡聚糖凝胶柱层东西比较贵 可以重复用,每次用之前,都是先用硅胶柱等,先分离的比较纯,再过葡聚糖凝胶Sephadex LH_20柱,这样就可以重复利用. 硅胶柱层析原理:硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程. 葡聚糖凝胶柱层析,其主要用于分离黄酮类化合物

黄泉鬼4593化学试验中,过柱子的专业术语叫什么? -
山刮超13829677744 ______ 常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱.我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相 的吸附柱.

黄泉鬼4593酪蛋白吗啡的分离纯化是什么?
山刮超13829677744 ______ 1、通过Bio-Gelp-2、、氨基酸分析仪、质谱分析通过峰值比较得到B一酪啡肽样物质.2、通过反相液相色谱十八烷醇酯硅胶柱,用线性梯度的乙睛,含有0.1%—氯乙酸在流速10ml/min进行洗脱.阿片肽片段可以通过苯乙基硅胶柱和氰基丙烷硅胶进一步纯化.3、用反相液相色谱,毛细管电泳,免疫印记的等电聚焦分离绵羊酪蛋白的方法已经得到评估.通过电子喷雾离子质谱分析和矩阵帮助激光吸收作为一种鉴别蛋白成分的工具.4、使用毛细管电泳一激光诱导荧光一增强型电荷耦合器件系统,用异硫氰酸荧光素柱前衍生了亮脑啡肽、甲硫脑啡肽、血管紧张肽、P物质4种生物活性肽.5、利用竞争抑制酶联免疫分析方法,对酪蛋白经胃蛋白酶水解产生的物质进行了定量分析.

黄泉鬼4593药品研发中的最关键的技术有哪些及其理由 -
山刮超13829677744 ______ 药品研发主要包括化学药合成、中药及生物.其研发的关键技术各不相同,以下简单列举: 1.化药 主要是确定疾病筛选好对其有效的结构式,用各种化学反应来获得需要的...

黄泉鬼4593含PhNH - 结构的物质用硅胶柱过,怎么出来的是油 -
山刮超13829677744 ______ 先用三乙胺冲一下柱中和一下酸性,或者直接用碱性三氧化二铝过柱