tba法mda含量测定

为探讨鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼血清、肝脏和鳃部的免疫、肝功能和抗氧化等生化指标的影响。

选取平均体长(10.12+1.03)cm，体质量(29.98+8.80)g的锦鲤150尾Y组鱼腥草添加量为 ６‰，S组腥草素钠添加量为0.024‰，K组基础日粮(对照组)｡

使用基础饲料和试验饲料分别进行饲养，分别于0，7，14d采样，分别检测血清和中的溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)。

血清和肝脏中谷天转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三(TG)总胆固醇(T-CHO)肝脏与中过氧化氢酶(CAT)、丙醛(MDA)、谷胱甘肤过氧化物酶(CSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)以及所测组织的总蛋白含量｡

结果表明：7d时Y组血清中LZM活性显著高于其他组(P<0.05)Y组血清中的TG、T-CHO含量呈下降趋势，14d时S组血清中AKP活性显著高于其他组(P<0.05)。

14d时Y组肝脏中GSH-Px量显著高S组和K组(P<0.05)，其他指标差异不显著。

7d时Y组中CSH-Px显著高于S组和K组(P<0.05。

14d时S组的LZM量显著高于Y组和K组(P<0.05)，Y组与S组的MDA含量显著低于K组(P<0.05)｡

说明饲料中添加适量鱼腥草和鱼腥草素钠均可提高锦鲤幼鱼的免疫，增强其抗氧化能力，但两者的作用时间和作用效果具有差异性，鱼腥草组的作用效果较好｡

●—≺ 材料与方法 ≻—●

试验材料

试验动物锦鲤幼鱼购自养殖有限公司，运至农学院进行消毒处理后置于71.4cmx42.8cmx50.2cm的循环水箱中暂养7d，待其适应环境后，测量体长，称量体质量｡

锦鲤幼鱼的平均体长(10.12±1.03)cm，平均体质量(29.98±8.80)g，基础饵料为自拟配方外加工膨化饲料，由天津市宝纸晨辉工厂提供，饲料配方见表1｡

试验饲料1为在基础饲料中添加6‰的鱼腥草，鱼腥草采购于本地中药店，试验添加量为团队实践得出基地生产养殖常用添加量。

试验饲料2为在基础饲料中添加6‰鱼腥草对应含量的鱼腥草素钠，添加量为0.024‰鱼腥草素钠购自西安贤泽生物科技有限公司｡

向鱼腥草粉中添加0.5%的海藻酸钠、适量蒸馏水，与基础饲料进行黏合｡

鱼腥草素钠直接溶于水后与基础饲料混合，2种试验饲料黏合均匀后，于避光干燥通风处风干｡

试验设计

暂养后选取150尾健康锦鲤幼鱼选取15尾健康锦鲤幼鱼0d取样其余随机分为3组每组3个重复，每个重复15尾鱼。

分组：基础饲料(K组)试验料1(Y组)和试验料2(S组)饵料投饲率为2%~3%.每天投喂2次，分别为09：00和16：00｡

每天清除缸底残留，每2d换水1次，换水量为总水量的1/3~1/2。

样品采集

低温解剖，收集锦鲤幼鱼的肝脏-80℃保存｡使用电动匀浆机进行组织研磨.按1：9的比例向组织样品中加入预冷生理盐水。

低温研磨后吸取组织匀浆液于2mL离心管中，4C2000r/min离心10min，吸取上清液进行指标测定，血清融化可直接进行指标检测｡

测定指标及方法

测定血清和鳃中的LZM、AKP和ACP，血清和肝脏中的ALT、ASTTG和T-CHO肝脏与中的CAT、MDA、GSH-Px、SOD以及所测组织的总蛋白含量｡

采用微量酶标法测定AKP和ACP活力，采用比浊法测定LZM活力，采用微板法测定ALT，ASTTG和T-CHO活力。

采用酸法测定CAT活力，采用紫外吸收法测定GSH-Px活力，采用TBA法测定MDA活力。

采用WST-1法测定采用TBA法测定MDA活力，采用WST-1法测定SOD活力。

采用考马斯亮蓝染色法测定总蛋白含量，以上指标均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定｡

●—≺ 结果与分析 ≻—●

鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼血清和鳃部免疫指标的影响

由表2可知，7d时Y组血清中LZM含量显著高于K组和S组且显著高于同组0d和14d的含量(P<0.05)。

7d时Y组与S组血清中的AKP含量均高于K组，且Y组与K组相比差异显著(P<0.05)14d时Y组与S组的含量均显著高于K组(P<0.05)，各组的ACP含量差异不显著(P>0.05)｡

由表3可知，14d时Y组与S组鳃部LZM含量均高于K组，且S组与K组相比差异显著(P<0.05)。

7d时Y组ACP含量显著高于K组和S组(P<0.05)，各组幼鱼腮部中的AKP含量差异不显著(P>0.05)｡

鱼腥草和鱼腥草素钢对锦鲤幼鱼肝脏和部抗氧化指标的影响

由表4可知，各组幼鱼肝脏中MDA含量均无显著差异(P>0.05)，14d时3组间的GSH-Px含量差异显著(P<0.05)。

7d时S组的SOD含量高于K组和Y组，差异不显著(P>0.05)；7d时Y组与S组的CAT含量均高于K组差异不显著(P>0.05)｡

由表5可知，14d时Y组与S组鳃部MDA含量显著低于K组，且显著低于本组0d和7d时的含量(P<0.05)。

7d时3组的GSH-Px含量差异显著(P<0.05)但14d时S组显著低于K组和Y组。

7d和14d时Y组与S组SOD含量均高于K组，差异不显著(P>0.05)，7d时Y组的CAT含量高于K组且14d时Y组与S组的CAT含量均高于K组差异不显著(P>0.05)｡

鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼血清和肝脏肝功能指标的影响

由表6可知，各组血清中ALT和AST含量均无显著差异(P>0.05)；Y组比K组的TG和T-CHO含量均呈下降趋势，差异不显著(P>0.05)。

由表7可知，7d时Y组与S组肝脏中AST含量均显著高于K组但14d时3组的AST含量差异不显著(P>005)。

7d时Y组和S组的T-CHO含量均低于K组日Y组与K组相比差异显著(P<0.05)，各组的ALT和TG含量差异均不显著(P>0.05)｡

●—≺ 讨论 ≻—●

鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼血清及鳃部免疫指标的影响

溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，溶菌酶是机体免疫防御的组成部分，具有溶解细菌细胞壁的作用｡

此外溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA和脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用｡

本研究发现鱼腥草和鱼腥草素钠具有提高锦鲤幼鱼血清和部中溶菌酶含量的作用｡

7d时Y组血清中溶菌酶与K组和S组相比差异显著14d时则差异不显著｡

而14d时S组部溶菌酶含量与K组相比较差异显著，分析原因可以能是两者作用时间不同，并且与鱼腥草素的积累量有关。

在饲料中添加2%的鱼腥草可以有效增强机体血液中溶菌酶活性，配比不同的刺五加、黄枸杞子和金银花等复方中草药对镜鲤(CyprinuscarpioL.)血清、头、肾和脾脏中溶菌酶含量存在不同的影响且作用时间存在差异。

在饲料中添加1%的鱼腥草可有效提高机体血液中ACP活性，增强机体免疫力｡

本研究显示添加鱼腥草和鱼腥草素钠后，与K组相比，提升了Y组和S组鳃部的ACP活性且7d时Y组部的ACP活性显著高于K组和S组。

分析原因可能与鱼腥草含有多种物质而鱼腥草素钠成分单一有关，鱼腥草中的多种活性物质可能会产生叠加作用，增强其免疫力｡

鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼肝脏及鳃部抗氧化指标的影响

丙二醛是膜脂过氧化的重要产物之一，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，具有细胞毒性，加剧膜损伤，因此在动植物衰老和抗性研究中MDA含量是一个常用指标。

本试验中随着养殖天数的增加各试验组锦鲤幼鱼肝脏中的MDA含量均无明显差异。

鳃部是鱼体与外界相连的呼吸系统，鱼腥草对锦鲤幼鱼鳃部功能影响的报道较少，但鱼腥草对于人和其他动物呼吸疾病的作用效果显著，且在畜牧业中鱼腥草对肺部的研究十分广泛｡

研究报道，饲料中添加鱼腥草或其他中草药可有效降低小鼠和猪肺部MDA含量。

因此在日粮中添加适量的鱼腥草可有效提高锦鲤幼鱼鳃部的抗氧化能力｡

谷胱甘胁过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶能保持细胞结构的完整性，GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体的硒水平｡

硒是GSH-Px系的组成成分，它能催化GSH-Px转变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的轻基化合物，从而保护细胞膜结构和功能免受过氧化物引起的损伤。

SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质｡

过氧化氢酶是一种酶类清除剂，可促使H，O，分解为分子氧和水.清除体内的过氧化氢从而使细胞免受H，0，的毒害。

SOD是机体抗氧化防御系统的第一道防线，CAT与SOD相辅相成，当体内活性氧增多时SOD首先发挥功能随后CAT发挥作用降低体内的活性氧含量，保护机体免受损伤。

研究报道，向饲料中添加党参[29]大黄素[30]等中草药可以有效诱导GSH-Px、SOD和CAT的产生。

14d时Y组肝脏中的GSH-Px活性以及7d时，鳃部的GSH-Px活性高于K组，14d时部的GSH-Px活性显著降低部SOD含量变化趋势与GSH-Px的趋势一致｡

上述变化趋势可能与GSH-PxSOD行使的功能有关｡Y组与S组肝脏和部的CAT含量均呈上升趋势且7d时Y组部的CAT含量显著高于K组和S组｡

鱼腥草及鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼血清及肝脏肝功能指标的影响

谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甘油三醋和总胆固醇等指标可用于判断鱼类生理状况和肝脏功能是否良好的指标｡

ALT是参与机体蛋白质代谢重要的氨基酸转氨酶，AST又称为天门冬氨酸氨基转移酶，主要分布于人和动物组织中。

当肝脏功能受损时ALT和AST含量会显著升高，鱼类血液中TG和T-CHO的含量可间接地反映肝脏对脂类代谢的情况｡

当鱼肝代谢紊乱时，血液中总胆固醇和甘油三酷含量显著升高，本试验中添加鱼腥草和鱼腥草素钠后，锦鲤幼鱼血液和肝脏中的ALT与AST含量差异不显著，说明鱼腥草和鱼腥草素钠的添加并未影响锦鲤幼鱼肝脏的代谢功能，Y组血清中TG和T-CHO含量较K组均呈下降趋势。

Y组血清中TG和T-CHO含量下降可能与鱼腥草中含有的黄酮类物质有关，黄酮类物质在降低血脂方面发挥着重要作用。

因此适量投喂鱼腥草不仅对锦鲤幼鱼肝脏的代谢没有产生危害，且还具有一定的保护作用｡

鱼腥草素钠是一种典型的表面活性剂，具有亲油的烷基和亲水的硫酸基团｡

在一定程度上随鱼腥草素同系物烷酞基碳原子数的增多，疏水性增强，对溶菌酶及超氧化物歧化酶的增强作用越大。

本研究表明，鱼腥草和鱼腥草素钠对锦鲤幼鱼不同指标的作用时间和作用效果存在一定的差异｡

7d时鱼腥草组比鱼腥草素钠组作用效果更显著，14d时2组之间无明显差异这可能与鱼腥草自身所含物质多元化，化学性质不稳定有关｡

●—≺ 结论 ≻—●

在日粮中添加适量鱼腥草和鱼腥草素钠均可提高锦鲤幼鱼的抗氧化能力，缓解肝功能损伤，进而提高锦鲤幼鱼机体的免疫力｡

但两者作用时间和作用效果存在一定差异，且使用的便捷度不同故可根据生产实际情况选择最适物质添加｡

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