乙醇沉淀dna为什么低温

磁珠质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，羟基磁珠能在高盐、低 pH

值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其

他杂质（蛋白质）结合，迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15 ℃保存，干冰运输；

羟基磁珠 2 ~ 8 ℃保存，室温运输；

其他组分 15 ~ 25 ℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37 ℃静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应

出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 μL 羟基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW（请确认是否加入无水乙

醇），混匀 2 min。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW，混匀 2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难

以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 μL 洗脱缓冲液 TB 或 ddH2O（洗脱液可在水浴

锅中预热），振荡混匀，置于 56 ℃水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔 2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠完全吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心

管中，并于-20℃保存。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、羟基磁珠置于 4℃保存，振荡混匀后再使用。

3、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

4、若低温保存时，Buffer P2 和 Buffer P3 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室温放置一段时

间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：异丙醇、乙醇。

宰雍连873无水乙醇在提取DNA时一定要预冷吗 -
安仲峡19627658174 ______ 我们当时做实验的时候没有遇冷.不过遇冷后会降低DNA的溶解度更容易提取!

宰雍连873DNA提取时,要使DNA不变性又不损失含量什么方法好 -
安仲峡19627658174 ______ 使DNA变性那就是降解了,提出来后放-20度冰箱,如果常用的话可以分装后低温保存,避免反复冻融.提取的时候使DNA变性没听过这一说,只可能是你加过裂解液DNA从细胞里释放出来后剧烈振荡了,那样会使DNA链断开的,EDTA就是保护DNA用的,NACL是提纯的时候用的,适量浓度的氯化钠可以使DNA在酒精中溶解度降到最低而使其形成沉淀,同事可以滤去蛋白质,后面要用75%酒精多洗几遍来去除NACL,不然OD比值会偏高.乙醇就是用来沉淀DNA的,也可以用异丙醇来沉淀,后面要用无水乙醇洗去异丙醇.基本上每一部提纯都会损失DNA,要根据你的实验目的来定,比如只是PCR的话就不需要那么麻烦,只是裂解出DNA即可.

宰雍连873用碘化钾法提取DNA的过程中乙醇的作用是什么?为什么用—20°预冷的乙醇效果更好? -
安仲峡19627658174 ______ 乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂. DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合.

宰雍连873提DNA时遇到难题 -
安仲峡19627658174 ______ 可以试试低温乙醇:按照正常的操作步骤,只是将乙醇事先密封好在冰箱里冷却24h;其次就是用0.14mol/L的NaCl溶液洗涤DNA提取物,因为DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度很低,但蛋白质的溶解度很高,这样就能洗去蛋白质.最后,可以用稀二苯胺在加热的条件下检测是否提取出了DNA(现象:变蓝)

宰雍连873为什么提取口腔粘膜中DNA时不能使用常温异丙醇? -
安仲峡19627658174 ______ 因为低温可以促进DNA的沉淀,在DNA量很少的情况(比如你的实验)可以提高抽提效率.不过如果DNA量较多时,常温也没问题,比如我们做小鼠脚趾的基因型鉴定时,都是常温操作的,沉淀照样超多.

宰雍连873博凌科为的Acryl Carrier核酸助沉剂对RNA沉淀的得率提高效果好吗? -
安仲峡19627658174 ______[答案] 博凌科为的Acryl Carrier核酸助沉剂对RNA沉淀的得率很高 乙醇低温沉淀是回收液体样品中的DNA和RNA的最常用方法.然而乙醇沉淀并不能完全回收样品中的核酸,至少丢失30%左右的核酸.如果液体样品中的核酸浓度很低或DNA

宰雍连873沉淀,我可以用无水乙醇沉淀吗 -
安仲峡19627658174 ______ 沉淀,我可以用无水乙醇沉淀吗 无水乙醇脱水,低温高盐dna溶解度低,三者一起可以最大限度沉淀dna

宰雍连87370%乙醇怎么洗沉淀提取DNA最后一步,用乙醇清洗沉淀,干燥.下来用双蒸水溶解,跑电泳 -
安仲峡19627658174 ______[答案] 70%乙醇在洗DNA时,就是把提取DNA中残余的一些脂类等杂技除去,以保证DNA的纯度,将70%的乙醇加入到提取的DNA管中,振荡后,在高速冷冻离心机中4度低温用大于13000rpm的转速离心至少15分钟,轻轻倒去上清溶液,并用干净的吸水...

宰雍连873在DNA的粗提取实验中,所用的酒精为什么必须是经过充分冷却后才能使用? -
安仲峡19627658174 ______ 太高会破坏dna结构 有可能溶解度会增加 减小dna提取量 是室温最好 因为实验时酒精没处理 求满意^_^^_^^_^^_^

宰雍连873DNA提取时加入冷的乙醇后无沉淀在做SDS法基因组总DNA 的提取及检测实验时,为什么加入冷的无水乙醇后,等了半个多小时后仍看不见DNA沉淀?可能... -
安仲峡19627658174 ______[答案] 有可能前面提得不好,或者获得的量很少,你离心下,看看能否沉出来