双酶切体系怎么算

那伊耐4060双酶切怎么老是切不完全 -
丰哲哀17381553109 ______ 首先,你看你的载体片段和目标片段的亮度比是不是大约10倍(因为一般T载体大小在2.5K~3k左右),如果是的话,那是正常现象. 如果你能看见线性化的载体或没有切开的载体,那么建议你换一下新开封的酶试试.

那伊耐4060pcr产物酶切 -
丰哲哀17381553109 ______ 体积与质量换算肯定是需要测浓度的.你需要准确计算的话就像楼上说的一样,用紫外分光光度计测DNA浓度.其实酶切的浓度不用算得那么精确,DNA加多了可以多反应一会嘛.你可以通过PCR产物的电泳条带亮度估算一下大致的浓度(与已知浓度的Marker比较),由此算出的DNA浓度用来酶切是没有问题的.

那伊耐4060双酶切总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶 -
丰哲哀17381553109 ______ 双酶切怎么老是切不完全需要看具体的体系,质粒的质量,具体的酶 比如 50ul的体系: 酶切片段 43微升 Buffer 5微升 Sal I 1微升 EcoR I 1微升 因为将来要做凝胶回收,体系一定要大,而且不用加水,提出的质粒溶液就直接用于酶切,如果再加水,那样浓度会更低,产量不高. 建议100ul体系加2ul酶,因为1ul酶切不完全.

那伊耐4060Hind III 和Sal I双酶切反应体系 -
丰哲哀17381553109 ______ 以20微升体系为例 方法一 Buffer Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好

那伊耐4060酶切体系1 酶在十倍以上体积才能发挥作用,问如果是双梅切,a酶用1ul,b酶用2ul,那么反应体系到底是(1+2)*10,还是2*10?2 如果反应总体积是50ul,... -
丰哲哀17381553109 ______[答案] 1.是2*10 2.分别是50/10=5,50/5=10,50/2=25. 一般来说几*就是对buffer稀释几倍.

那伊耐4060单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同? -
丰哲哀17381553109 ______ 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶在作用下,它们就连到一起了.你该看看《生物化学》或基因工程方面的书.这都是基本的知识啊.

那伊耐4060Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好... -
丰哲哀17381553109 ______[答案] 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加...

那伊耐4060PCR上游和下游引物可以插入同一种酶切位点吗 -
丰哲哀17381553109 ______ 可以,只要连接的质粒也是用这种酶进行单酶切,不过这种连接方式效率很低,通常才用的都是两种不同的酶进行的双酶切,然后做连接转化.

那伊耐4060全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常 -
丰哲哀17381553109 ______ 你的实验目的和详细步骤没说清楚.我先就现有的描述分析一下:很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶...

那伊耐4060双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要 -
丰哲哀17381553109 ______ 1、回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...