酶切体系计算公式

冷淑砌819要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少? -
钭群影19579123227 ______[答案] 因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些....

冷淑砌819如何算酶用量? -
钭群影19579123227 ______ 这个是用酶的活力计算的,给你一个例子: 例:测定NADH氧化酶酶活,1ml反应体系中酶液750微升,每分钟OD340降低值为0.014,摩尔吸光系数为6220L/mol.cm,比色皿光程为1cm,总蛋白含量为29微克每毫升,请问如果定义每分钟每毫...

冷淑砌819Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?? -
钭群影19579123227 ______ 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10*H Buffer(使得酶切体系中的Buffer浓度为1*工作浓度),最后加入适量的质粒分子并双蒸水补足反应体积至50 μl.

冷淑砌819pcr产物酶切 -
钭群影19579123227 ______ 体积与质量换算肯定是需要测浓度的.你需要准确计算的话就像楼上说的一样,用紫外分光光度计测DNA浓度.其实酶切的浓度不用算得那么精确,DNA加多了可以多反应一会嘛.你可以通过PCR产物的电泳条带亮度估算一下大致的浓度(与已知浓度的Marker比较),由此算出的DNA浓度用来酶切是没有问题的.

冷淑砌819对了我想问你一下,你之前说的在送去测序之前进行酶切检测,我想知道你的酶切体系是多少 -
钭群影19579123227 ______ 我一般检测的酶切体系,10ul,质粒视电泳条带亮弱,一般5ul 单酶切就1ul,双酶切,酶各0.5ul, 若是割胶回收用来连接,我因为之前总是连接转化不长菌斑,所以我都是20ul,4管,最后并一管,割胶回收. 检测10ul足够了,因为如果切了不对,换酶或者扔了,都不心疼....,点样5ul电泳就够了,当然你如果怕条带不亮,也可以全点了

冷淑砌819引物的长度包括酶切位点在内么?计算Tm值以及计算GC含量时用算酶切位点的么? -
钭群影19579123227 ______ 带酶切位点的引物是算在长度内的,计算Tm值和GC含量都应将酶切位点包括在内

冷淑砌819dna指纹法运用了DNA什么功?dna指纹法运用了DNA什么功能
钭群影19579123227 ______ DNA指纹技术原理: 一般要通过以下几点来完成: 1、将送检的各种生物学检样,... 片段进行电泳,各酶切片段就会按其长度大小在电场中进行分离. 4、先用碱性溶液使...

冷淑砌819双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的 -
钭群影19579123227 ______ 模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度. 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.

冷淑砌819请教双酶切反应体系的建立 -
钭群影19579123227 ______ 做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解.为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来.我的方法是培基高温消毒后放在烤箱里,烤箱一般温度为55-60度,然后做的时候拿出来,这样好掌握温度.铺板前后注意用吹风机吹干; 对照的设立:为验证双酶切是否成功.

冷淑砌819请问医生我家的宝宝刚一周岁被稀饭烫到起了请问被稀饭烫到第二天起了?
钭群影19579123227 ______ 根据您的描述您孩子被烫伤后的这种情况是没有办法去给她洗头会留下伤疤的这种情况的要看它身上的尘土面体等这样一些话哦哦还有孩子身体本身也不是斑痕体质也会出现留疤的这种情况. 孩子的这种情况,建议您要为他好好的保护好创面.