双酶切体系怎么配

丁空贷3780若DNA需要使用两种酶进行酶切,应如何进行? -
充很卖18557221472 ______ 如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer,那就可以同时双酶切.如果找不到就只能采用分步酶切.分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书.

丁空贷3780双酶切总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶 -
充很卖18557221472 ______ 双酶切怎么老是切不完全需要看具体的体系,质粒的质量,具体的酶 比如 50ul的体系: 酶切片段 43微升 Buffer 5微升 Sal I 1微升 EcoR I 1微升 因为将来要做凝胶回收,体系一定要大,而且不用加水,提出的质粒溶液就直接用于酶切,如果再加水,那样浓度会更低,产量不高. 建议100ul体系加2ul酶,因为1ul酶切不完全.

丁空贷378020ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别 -
充很卖18557221472 ______ 20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别:DNA的量是3.5微升 1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高. 2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也...

丁空贷3780Hind III 和Sal I双酶切反应体系 -
充很卖18557221472 ______ 以20微升体系为例 方法一 Buffer Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好

丁空贷3780NEB公司的BamHⅠ和KpnⅠ双酶切体系怎么设计?
充很卖18557221472 ______ 何必两步回收呢 切了一个灭活十分钟 继续切 或者换MBI的酶 它有通用的buffer 用2X的 不过NEB的酶是最好的了 没有必要换了

丁空贷3780Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢?只能进行分步酶切吗? -
充很卖18557221472 ______[答案] 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶...

丁空贷3780为什么用两种酶的时候可以使目的基因和质粒准确结合? -
充很卖18557221472 ______[答案] 我想你说的是双酶切连接体系,这是因为一般选择双酶切连接时,两个酶的突出粘端是不同的,而连接时,需要首先碱基配对,然后T4连接酶将其gap连接起来,因此不同的配切后产生的粘端不能配对,而只有同一个酶切产生的粘端可以...

丁空贷3780什么情况下要使用双酶切的方法? -
充很卖18557221472 ______ 很多实验都会用到双酶切,特别是载体构建,需要把载体切开两个不同的末端时会根据序列的具体情况选择双酶切.请说明你是做什么实验?

丁空贷3780双酶切好还是分步酶切好 -
充很卖18557221472 ______ 两种酶的restriction buffer一样的话,就双酶切;如果不一样,那就没办法了,只能分步酶切.

丁空贷3780找双酶切位点有哪些原则?我的目的片段连载PMD18 - T载体上,现在想做双酶切,再和绿色荧光蛋白的载体连接起来做表达,已经确认一个酶EcorI,另一个... -
充很卖18557221472 ______[答案] 另一个酶应该选择和EcoR1共buffer的,酶切温度要一致