叠氮钠防腐剂
ELISA即酶联免疫吸附实验，是目前广泛应用于各种抗原抗体检测的方法，主要有灵敏度高和特异性强的特点。ELISA操作步骤看似简单，整个测定过程中却有诸多影响因素，导致检测结果可能与实际结果偏差较大。为帮助大家分析实验中常见问题，我们将常见问题的可能原因和解决方法归纳总结于下表：
问题一：高背景或阴性对照值偏高
可能原因 | 建议 |
阴性对照孔被阳性对照或样品污染 | 洗涤时，勿将洗液溢出孔外 |
抗体非特异性结合 | 封闭液不适合，更换封闭液 |
酶结合物过浓 | 请检查酶结合物是否按说明书规定稀释 |
孵育温度过高 | 检查孵育箱的温度是否正确、稳定 |
底物在使用前曝光 | 应保存在暗处，避光 |
读板前停留时间过长 | 加终止液后3分钟内读数 |
问题二：阳性对照值偏低或低吸光度
可能原因 | 建议 |
试剂未平衡至室温 | 实验开始前，将试剂盒从冰箱取出平衡至室温 |
检测体积偏小 | 检查移液器吸液管道是否堵塞 |
孵育时间过短 | 使用计时器，准确孵育时间 |
底物受污染 | 使用新配置的试剂，重新实验 |
包装袋中有湿气 | 检查袋中是否有干燥剂 |
样本中有抑制剂 | 叠氮钠会抑制HRP酶的活性 |
问题三：边缘效应
可能原因 | 建议 |
蒸发 | 各步之间，须使用封版胶密封反应板 |
温度不均匀 | 校准孵育箱，勿叠放反应板 |
问题四：标准曲线不佳
可能原因 | 建议 |
倍比稀释标准品时未混匀 | 稀释标准品的每一步均需混匀 |
过早稀释 | 标准品在快要使用时稀释 |
加入的体积不正确 | 使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中 |
问题五：标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号
可能原因 | 建议 |
样本中无检测物或检测物含量极低 | 设置内参，重新实验 |
样本中其他物质影响/掩盖检测 | 作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率 |
样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值 | 适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内 |
问题六：重复性较差
可能原因 | 建议 |
微孔中有气泡 | 用针尖挑破气泡 |
试剂未混匀 | 确保充分混匀试剂 |
样本中有杂质或沉淀物 | 使用前离心 |
微孔包被面被吸头划破 | 加液时小心操作 |
使用用过的封板胶纸 | 每次须使用新的封板胶封住反应孔 |
问题七：假阳性反应
可能原因 | 建议 |
洗涤不充分 | 使用前需检查洗板机是否正常工作 |
洗板机管道堵塞 | 需经常维护洗板机 |
加结合物时，洒在微孔边缘 | 小心向微孔加入结合物，加入微孔底部中央，避免与孔壁和边缘接触 |
检测样本中含有红细胞 | 离心 |
微孔中液体挥发 | 用封板胶密封反应孔，置于湿盒内 |
问题八：整块板产生阳性OD值或整个板显蓝色
可能原因 | 建议 |
洗涤液体积不足或底物被残留于孔底的结合物所污染 | 洗涤时，缓冲液充满至孔边缘，但要确保不能溢出孔外 |
结合物浓度过高 | 检查是否按照说明书推荐比例稀释 |
血清中有血清因子 | 勿加热血清 |
底物容器不洁净 | 用酸清洗容器瓶，用蒸馏水冲洗 |
底物孵育时，微孔板曝光 | 加底物时，立即将板置于暗处 |
问题九：整块板OD值偏低
可能原因 | 建议 |
显色时间不足 | 适当延长显色时间 |
孵育温度偏低 | 36度为最适反应温度（欣博盛ELISA试剂盒） |
未加终止液 | 加入终止液，增强颜色反应的强度，稳定最终的颜色反应 |
问题十：显色缓慢
可能原因 | 建议 |
样本未置于室温 | 实验开始前，将样本平衡至室温 |
酶结合物活性减弱 | 检测稀释度 |
酶活性收到抑制如叠氮钠 | 避免实验不当的防腐剂 |
显色温度不适当 | 按说明书操作 |
宗彼府2945叠氮钠要用多大浓度的次氯酸钠溶液处理 -
谷柔宋18581728789 ______ 次氯酸钠分子量为77.44,氯的原子量为35.5, 次氯酸钠含氯:35.5/77.44=45.84%. 100÷45.84*5=10.9 氯酸钠的浓度是10.9%.
宗彼府2945怎么配制0.05%叠氮化钠溶液? -
谷柔宋18581728789 ______ 精确称取50mg叠氮钠,用50ml蒸馏水溶解到100ml烧杯中,玻璃棒引流,移入100ml容量瓶,分别再用20ml蒸馏水洗涤烧杯两次,玻璃棒引流移入容量瓶,最后用滴管吸取蒸馏水滴至容量瓶刻度,盖好容量瓶瓶盖,颠倒混匀几次.
宗彼府2945称取叠氮化钠必须要用牛角匙吗?实验室没有,可以用塑料勺代替吗?要称取叠氮化钠作防腐剂用,为了保险起见,不敢用金属药匙,用塑料勺可以吗?[ 来... -
谷柔宋18581728789 ______[答案] 不是金属的应该问题不大,瓷的也可以
宗彼府2945小鼠眼球取血技巧是什么? -
谷柔宋18581728789 ______ 小鼠摘除眼球采血及分离血清 一.器材 离心管,弯头镊子,离心机,移液器 二.步骤 1. 摘除眼球采血 (1)左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部; (2)中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部,捻动拇指,轻...
宗彼府2945叠氮钠怎样能爆炸 -
谷柔宋18581728789 ______ 叠氮钠性质:密度1.846.熔点275°C.沸点300°C (dec.).水溶性420 g/L (17°C).白色粉末. 剧毒物品,遇碰撞易爆炸.
宗彼府2945含有低浓度0.2%的叠氮化钠(NaN3)的溶液在运输,进出口方面有什么限制? -
谷柔宋18581728789 ______ 我们在实验中时常会用到叠氮钠,说两句希望对您有帮助. 由于叠氮钠是管控药品,其购买、存储、运输都需要公安部门的审批,估计进出口时候更加需要多个部门(包括公安、质检或安监部门)的审批.不过我指的是叠氮钠固体粉末,如此稀释的溶液也许不那么严格. 总之,需要咨询具体的部门.
宗彼府2945HRP底物如何进行贮存?
谷柔宋18581728789 ______ 纯HRP干燥贮存于–20oC可保持稳定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存,可使酶结合物稳定数年.HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定,用甲苯与石蜡切片处理...
宗彼府2945叠氮化钠是什么东西???
谷柔宋18581728789 ______ 叠氮化钠 无色结晶,易溶于水,微溶于醇,醚. 用途:是头孢类的重要中间体,广泛用于汽车安全气囊及农用杀菌、杀虫剂.
宗彼府2945叠氮化钠的用途简介有哪些内容?
谷柔宋18581728789 ______ 用作有机合成原料、农药原料、分析试剂.用作药品和炸药,也用来制叠氮酸、叠氮酸酯、叠氮化铅和纯的金属钠.