异丙醇提取rna的原理

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

祁牵临4240为什么我提取RNA,用异丙醇后没有沉淀出现 -
党亮残18478698726 ______ 前面提取的RNA经异丙醇沉淀后,总会含有一些未除去的蛋白和其它杂质分子,这些蛋白和杂质分子如果不除尽的话,就会直接影响所提取的RNA的纯度和稳定性.为此,就需要用70%乙醇洗涤沉淀(因为在70%乙醇里RNA是不溶的,而一些蛋白和其它杂质分子却可溶),并且最好是洗涤2次,然后高速离心后,倒去上清,即可得到较纯的RNA沉淀.用无水乙醇则达不到这个目的

祁牵临4240RNA的提取和反转录的实验步骤? -
党亮残18478698726 ______ 小麦总RNA的提取 实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备.我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度,尤其是完整性、防止修饰和纯度.RNA是单链,2'OH是它的化学性质远比DNA活泼.所...

祁牵临4240提取DNA为什么需在碱性条件下? -
党亮残18478698726 ______ 这个涉及到核酸的酸碱水解知识 在酸性条件下,DNA和RNA都容易被水解,但最不稳定是的嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键.所以RNA的酸稳定性好稍微好一点. 在碱性条件下,RNA由于2'-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在碱性条件下相对稳定.

祁牵临4240RNA提取中加入氯仿和异丙醇的原因 -
党亮残18478698726 ______ 氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通过变性作用抑制RNase活性;二是RNA提取试剂中通常含有苯酚(Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚),苯酚微溶于水,抽提烷之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉;三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质(比如油脂、脂溶性色素等),起到一定除杂作用

祁牵临4240SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿离心后加异丙醇的作用?SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿离心后为什么加异丙醇,即异丙醇的作用是什么?还... -
党亮残18478698726 ______[答案] 异丙醇可以沉淀DNA和RNA(即核酸) 静置是为了增加沉淀效果

祁牵临4240怎么提取RNA? -
党亮残18478698726 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

祁牵临4240呵呵,提取RNA过程? -
党亮残18478698726 ______[答案] 现在常用的是Trizol法. 提前将研钵、研棒、剪刀、镊子等用锡箔纸包好200度烘烤6小时,与实验前放到冰箱中预冷.枪头、... 整个处理过程必须带手套(最好带口罩),否则环境中的RNA酶会降解RNA. 1、取鲜样或者在-80度保存样品,液氮研磨样品...

祁牵临4240动物组织如何提取总RNA? -
党亮残18478698726 ______[答案] Trizol法 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品... 3、取上层水相于一新的离心管,按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,剧烈振摇使混匀,4℃,12,000rpm离心...

祁牵临4240提取染色体dna的基本原理,操作中注意什么 -
党亮残18478698726 ______ 提染色体dna的基本原理: 基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子量尽可能大,以此增加外源基因获得率,但要获得大片段的DNA 非易事,细菌基因组DNA通常是个很大的环状态DNA,而在抽提过程中,不可避免的机械剪切力必将切...

祁牵临4240全血基因组DNA提取试剂盒的作用原理是怎样的
党亮残18478698726 ______ 全血基因组DNA提取试剂盒作用原理: 全血基因组DNA提取试剂盒特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA. 离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及...