提取rna时加入乙醇的作用

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

荀卷转4758CTAB法提取RNA时需要2%的β巯基乙醇,是加入β巯基乙醇,使终浓度为2%,还是先配好2%的β巯基乙醇 -
钮常凯17317353770 ______[答案] 终浓度,也就是100ml加2ml

荀卷转4758有关RNA提取的问题 -
钮常凯17317353770 ______ RNA极易变性,你那样不可能提到,顶多是DNA.提取RNA需要加入极强的蛋白质变性剂,比如:异硫氰酸胍!目前提取RNA的方法:用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提!注意事项:提取用的玻璃器皿要经过高温焙烧,塑料用具经过高压灭菌,不能灭菌的用0.1%的焦炭酸二乙酯处理,再煮沸以除净焦炭酸二乙酯;在破碎细胞细胞的同时加入强的变性剂使RNase失活;在RNA反应体系中加入RNase的抑制剂.

荀卷转4758RNA的提取方法步骤及原理. -
钮常凯17317353770 ______[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...

荀卷转4758提取RNA时所用百分之七十五乙醇怎么?提取RNA时所用百分之七十
钮常凯17317353770 ______ 配75%的乙醇当然要RNAse Free的水,先将去离子水用DEPC进行处理,然后高压,将DEPC分解掉.超净台里操做时,最好不要开风机.你自己要戴上帽子口罩手套.匀浆用的转头可以在200度干烤3小时.放置1.5ML的离心管的架子可以不处理.操作前要想好你的每一步,尽量把要用的东西都准备齐.尤其要把各种耗材处理好,以防RNA的降解.还有乙醇最好是新买的

荀卷转4758提RNA时加入75%药用酒精沉淀消失提RNA时到加异丙醇这一步,沉淀很好,然后就加入75%药用酒精,沉淀就没了,这是为什么呢?明明应该是不溶的啊还... -
钮常凯17317353770 ______[答案] 不可能,加异丙醇有沉淀的话,加75%乙醇是不可能没沉淀的,如果没了,只有两种可能:1、你加的乙醇浓度不对,低于75%,所以RNA溶解了;2、你加的乙醇里含有RNA酶,所以RNA降解了.应该是你加的75%的药用酒精中25%的水里混有R...

荀卷转4758根据核酸在细胞内的分布 存在方式及其特性,提取过程中采取了什么相应的措施 -
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荀卷转4758rna的提取还有何种方法?是比较各自的优缺点? -
钮常凯17317353770 ______[答案] 常见的的总RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法. RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)...

荀卷转4758如何得到高产量的RNA粗制品?要详细点的. -
钮常凯17317353770 ______[答案] 【实验原理】酵母核酸中RNA含量较多.RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品.【实验材料和主要仪器、试剂】1.实验材料:酵母粉 (或酵母片)2.实验仪器...

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荀卷转4758如何提取芦荟RNA 最好是苯酚法
钮常凯17317353770 ______ 动植物组织mRNA提取: 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织. 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽. 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水...