成功的rna电泳图

一、实验目的

掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法。

二、实验原理

RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%--1.4%的凝胶，不 同的 RNA 条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动 率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定 RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快 速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可。

三、实验材料、器具及药品

蘑菇的总 RNA 溶液。  电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检 测仪等。  琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液，0.5μg/ml 溴化乙锭（EB）10X 载样缓冲液。

四、实验步骤

（1）用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

（2）在超净工作台上，用移液器吸取总 RNA 样品 4μl 于封口膜上。在实验台上再加入 5μl 1×TAE 电泳缓冲液及 1μl  的 10X 载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。

（3）打开电源开关，调节电压至 100V，使 RNA 由负极向正极电泳，约 30min 后将凝胶

放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。

RNA 的变性琼脂糖凝胶检测

试剂：

（1）MOPS 缓冲液（10*）:0.4mol/L  吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc,10mol/L EDTA。

（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。

（3）甲醛。

（4）去离子甲酰胺。v  电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2 灌满——室温放置 10 分钟——0.1%DEPC 水冲洗。

操作：

（1）  将制胶用具用 70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。

（2） 配制琼脂糖凝胶。

①称取 0.5g 琼脂糖，置干净的 100ml 锥形瓶中，加入 40ml 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。

②待胶凉至 60--70  ℃，依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和 0.5ul 溴化乙锭，混合均匀。

③灌制琼脂糖凝胶。

（3） 样品准备：

① 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS 缓冲液  2ul，甲醛 3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul，RNA  样品 4.5ul,混匀。

② 将离心管置于 60℃水浴中保 10 分钟，再置冰上 2 分钟。

③  向管中加入 3ul 上样染料，混匀。

（4）上样。

（5）电泳：电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液，于 7.5V/ml 的电压下电泳。

（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。

柯军滢3873提取rna跑胶用的marker -
勾宝俗15641932208 ______ 博凌科为-为你首先图片最上面的条带是基因组污染.其次你的条带整体向上偏是电泳时电压的问题.最后每个泳道的条带有点涂摸,我猜测是你的胶没有溶好导致的.

柯军滢3873为什么.trizol提取RNA 经典三条带显示rna完整性
勾宝俗15641932208 ______ 电泳时,三条带中,核糖体RNA(rRNA)在距离胶孔较近的位置上,28s、18s为核糖体的大、小两个亚基,第三条带,也就是最下面那条为5.8s和5s(以上为真核生物).因为长度差距不大,故很难在电泳中区分出来. 在提取过程中,有时会出现RNA酶的污染,导致RNA降解.降解时,越大的RNA越容易降解,且降解为较小的片段,在电泳时也会跑得更快. 所以,电泳时,若缺失28s条带,28s条带亮度较弱,5s和5.8s条带变强或条带下方有弥散,则说明RNA完整性被破坏.且条带越弱,越模糊,说明RNA完整性越差,RNA中所含的信息就越不完整

柯军滢3873总RNA是由几部分组成的?其琼脂糖凝胶电泳的带形是怎样的? -
勾宝俗15641932208 ______ 你指的是提取的总RNA吗?如果是的话是这样的mRNA tRNA rRNA,但电泳只能看到两条带,是含量最大的rRNA,分别为18s和28s,在实验中靠这两条带的整齐程度,判断是否存在降解.

柯军滢3873总RNA电泳求分析 -
勾宝俗15641932208 ______ 在泳道的中间有块杂质,堵住了泳道里RNA正常的迁移.如图: 第六道应该和第四道差不多的样子.

柯军滢3873RNA 电泳出现4条带,不知道什么原因 -
勾宝俗15641932208 ______ 其实你要首先理解一下电泳染色的原理. 电泳时,我们一般使用的染色剂比如EB啊,GEL-Red啊之类的,都是潜入DNA双螺旋的分子间,所以能拿来作为结合染色染料.而对于RNA,其大多为单链形式存在,这些染料还能进行染色的原因,是因为其的大分子还能发生自身或相互间的2级缠绕,使得染料还有掺入的余地. 那么,如果这些大分子发生降级或者片段化成为小片段,发生自身缠绕的和相互聚合的几率及小了很多,染料难于掺入,当然不显色. 而对于测OD值来说,我们关注的是其吸光度,吸光度这与RNA中的碱基有关,与分子结构无关,所以当然能测出值来.并且,降解和片段化的程度越高,暴露出的碱基愈多,吸光度也越大,测出的值当然也越高,这是不矛盾的.

柯军滢3873求救:RNA变性电泳!高分悬赏大神救我! -
勾宝俗15641932208 ______ 看起来没有什么问题,真的很奇怪,即便RNA不纯也不至于全没有带,不过我想知道,你有没有拿别人抽的RNA做阳性对照来确认胶和染法没有问题?不过Marker亮的话如果不是Marker本身带染料就可以推断染料的量是够的.上样孔中很亮多...

柯军滢3873如何评价总RNA或mRNA的质量 -
勾宝俗15641932208 ______ 之前只是做数据分析,被问到实验方面的东西就傻眼了,什么都不会.特此总结了网上的一些信息.该篇日志综合了多个网上的资源,未提供引用信息还望见谅!1. 相关概念 RNA质检参数OD260/OD280、OD260/OD230的意义.260、280、...

柯军滢3873这是我跑的RNA电泳图.这次图与以前的相比有点奇怪,以前用TRIZOL法,这次用的是GTC试剂盒. -
勾宝俗15641932208 ______ 展开全部2kb左右是18s 和 28s

柯军滢3873总rna的电泳过程中提示有rna的降解是在什么情况下 -
勾宝俗15641932208 ______ RNA电泳后可以看见有三条条带,都是rRNA.一般来说,看见两条的也可以用,要是啥也看不见,模模糊糊的,那就是降解了.

柯军滢3873在做哺乳动物组织基因组dna的提取试验中,将提取好的dna跑电泳,若基因组dna有蛋白质和rna污染会有什么电泳结果 -
勾宝俗15641932208 ______[答案] 蛋白污染会在电泳孔有亮带,跑不出来. RNA污染会在最下边,一团弥散的亮带,但DNA如果降解的话也有这种现象.