植物rna电泳图分析

一、实验目的

掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法。

二、实验原理

RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%--1.4%的凝胶，不 同的 RNA 条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动 率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定 RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快 速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可。

三、实验材料、器具及药品

蘑菇的总 RNA 溶液。  电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检 测仪等。  琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液，0.5μg/ml 溴化乙锭（EB）10X 载样缓冲液。

四、实验步骤

（1）用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

（2）在超净工作台上，用移液器吸取总 RNA 样品 4μl 于封口膜上。在实验台上再加入 5μl 1×TAE 电泳缓冲液及 1μl  的 10X 载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。

（3）打开电源开关，调节电压至 100V，使 RNA 由负极向正极电泳，约 30min 后将凝胶

放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。

RNA 的变性琼脂糖凝胶检测

试剂：

（1）MOPS 缓冲液（10*）:0.4mol/L  吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc,10mol/L EDTA。

（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。

（3）甲醛。

（4）去离子甲酰胺。v  电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2 灌满——室温放置 10 分钟——0.1%DEPC 水冲洗。

操作：

（1）  将制胶用具用 70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。

（2） 配制琼脂糖凝胶。

①称取 0.5g 琼脂糖，置干净的 100ml 锥形瓶中，加入 40ml 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。

②待胶凉至 60--70  ℃，依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和 0.5ul 溴化乙锭，混合均匀。

③灌制琼脂糖凝胶。

（3） 样品准备：

① 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS 缓冲液  2ul，甲醛 3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul，RNA  样品 4.5ul,混匀。

② 将离心管置于 60℃水浴中保 10 分钟，再置冰上 2 分钟。

③  向管中加入 3ul 上样染料，混匀。

（4）上样。

（5）电泳：电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液，于 7.5V/ml 的电压下电泳。

（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。

仇蚂邦3027RNA的电泳图分析,我们提取的RNA跑出的是弥散的条带? -
匡砍届13440451913 ______ 很可能是RNA降解了! 对于内源RNA酶的控制,液氮要充足,裂解细胞的试剂成分要充足.液氮和试剂都要抑制内源RNA酶的作用. 对于外源RNA酶的控制,对于器皿耗材,严格讲台面也要处理..可以用DEPC处理吸头,离心管之类的耗材.不过DEPC是强致癌剂(参见分子克隆),操作需要谨慎.另外,操作人员也要尽可能戴口罩,手套. 我们华越洋生物公司,有致癌物DEPC的替代品【外源RNA酶清除剂】销售,无毒,操作方便,价格也要便宜很多,如果要避免RNA降解,建议考虑购买使用.

仇蚂邦3027看一下我跑的RNA电泳怎么样帮我分析一下 -
匡砍届13440451913 ______ 有拖带~~而且凝胶成像的时候放的不好~~所以相也照的不好~~28s亮过18s~~还行~~一般般~~

仇蚂邦3027求教高手!!基因组DNA电泳现象:电泳图分析一下(分布不均的原因,移动速率的影响因素)还有偶的结果 -
匡砍届13440451913 ______ 你的这个电泳图基本上都可以看到主条带,从上往下第一条很清晰的条带就是基因组DNA,这条条带除了二号基本是比较完整而明亮的,做下游操作基本没啥问题.二号不是没有,而是量低了.四号和五号可以看到点样孔里面有些明亮的东西,...

仇蚂邦3027RNA变性电泳的原理是什么?
匡砍届13440451913 ______ RNA变性电泳的原理,是用一定剂量的乙二醛-二甲基亚矾,或甲醛和甲基氢氧化汞等处理RNA样品和凝胶,使双链RNA在电泳过程中变性而完全解离形成单链

仇蚂邦3027请看看我的RNA电泳结果 -
匡砍届13440451913 ______ 可能是RNA碎了吧,本科生,飘走 而且,偶们上课的时候说mRNA看不见的,只有rRNA能看到两条亮带,一个大亚基,一个小亚基

仇蚂邦3027吸光度测定值与电泳结果 分析我用高盐低pH法提取植物DNA,测了吸光度和进行了凝胶电泳,结果在电泳图上无条带,但是有吸光度,而且吸光度值在1.8... -
匡砍届13440451913 ______[答案] 对于OD260/280,核酸降解使之偏高,有蛋白则偏低,所以1.8并不一定是纯DNA,还要看电泳结果.如果marker正常,就是样品问题,比如降解;如果marker也不正常,就是电泳有问题.

仇蚂邦3027总rna电泳图(MCF - 7细胞)看到四个条带 -
匡砍届13440451913 ______ 如果这种细胞正在旺盛的表达什么蛋白的话是可能出现这种情况的,经典的3条带只是核糖体RNA,细胞中除了核糖体RNA当然还有很多其他RNA,从你的图上看核糖体RNA的三条带清晰所以RNA没有降解,那么出现的其他条带应该就是表达的其他RNA了

仇蚂邦3027如何分析rna seq数据 -
匡砍届13440451913 ______ 如果是定性分析,这可以选用 反转录pcr 如果是定量分析,可以用western印记来检测RNA量,或提取全RNA用电泳分析,或在所分析序列中加入荧光标签,观察所表达蛋白的荧光强度

仇蚂邦3027谁能帮我分析一下这个DNA凝胶电泳图,第一个为marker第二个为植物DNA第三个为大肠杆菌 -
匡砍届13440451913 ______ 1. 没有明确marker的大小,但是你最下面有一团小的物质,估计为RNA,提取或最后溶解的时候注意加RNA酶; 2. 植物DNA基本没有提取到,植物DNA很大,都会在最上面,你提取的质量不好. 3. 大肠杆菌提取的是质粒还是基因组?结果也不是很好.

仇蚂邦3027提取植物基因组DNA后紫外分光光度计检测值标准,为什么电泳图很不好?DNA稀释50倍以后进行紫外分光光度计检测,吸光度比值1.90左右,为什么电泳... -
匡砍届13440451913 ______[答案] 用的是那种提取方法? 有没有加RNase分解RNA? 我记得中间有几步很关键,再重复一遍,注意一下细节. 拖尾说明基因片段很多,可能在离心环节或是缓冲液有问题.