提质粒hbc+buffer作用
冉温易4879大量提取质粒DNA用什么方法?
谈怪茅13338049118 ______ 1、细菌的收获:将菌液倒入合适的离心管中,8000g离心5分钟,弃上清,并在吸水纸上倒置离心管使上清全部流尽. 2、将细菌沉淀重悬于10ml溶液I中. 溶液I:50mmol/L葡萄糖,25mmol/LTris•Cl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0) 注:(1)若...
冉温易4879质粒dna提取的时候,为什么要加氨苄青霉素 -
谈怪茅13338049118 ______ 汗,没听说过氨苄青霉素可以破坏细胞壁的,这样子的话就不需要碱裂解了,氨苄青霉素肯定是在扩增菌体的时候加入培养基的,不会对提取本身造成影响,但是可以阻止杂菌生长,增加目的质粒的拷贝数(前提是,质粒是氨苄抗性的,别加错啦)
冉温易4879提完质粒后需要做什么工作?是跑琼脂糖电泳还是做PCR检测?PCR检测和酶切检测各指的什么? -
谈怪茅13338049118 ______[答案] 一般先跑琼脂糖电泳检测是否提出了高质量的质粒,然后通过PCR检测所提的质粒是否是目的质粒. PCR检测指用特异引物对目的DNA进行PCR,根据产物判断 DNA是否含有目标序列.酶切检测则是通过对目的DNA上已知酶切位点的酶切,根据产物...
冉温易4879比如质粒中提,是什么意思 -
谈怪茅13338049118 ______ 提这个是指质粒提取的量. 如果每次只用几毫升菌液,得到几十微克质粒,属于小提. 使用几百毫升甚至更多的菌液,得到毫克级的质粒,属于大提. 介于2者之间,就是中提了.
冉温易4879提取DNA时,防止DNA断裂的方法有哪些? -
谈怪茅13338049118 ______ 提基因组DNA:基因组断裂是肯定的,主要是要抑制Dnase的活性.提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段,所以为保证DNA的完整性,各步操作均应较温和,避免剧烈震荡. 浓盐法提取时,为抑制组织中的DNase对DNA 的降解...
冉温易4879提质粒后有RNA污染,可以加点RNA酶处理吗 -
谈怪茅13338049118 ______ 实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题.我觉得只要是注意以下2点就可以了:1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套.2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的.无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大.
冉温易4879各位高人 我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个 -
谈怪茅13338049118 ______ 提取质粒.这个量就很大了.给你个简单的protocol PCR 你的基因 对PCR产物,和空质粒,因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到.如果菌落挑完了,突变又多),不如电激转化好,就重新转化.这段时间要多扶老太太...
冉温易4879求助,如何设计长片断的PCR引物和选取适当质粒 -
谈怪茅13338049118 ______ 如果你的意思是如何对插入片段/基因筛选的话,可以考虑使用有LacZ/蓝白斑筛选性质的载体.如果没有合适的载体可以用菌落PCR的方法,设计PCR引物在载体插入位点2边各约100bp以内(常用引物的多克隆位点两侧一般有通用引物区域),在转化之后的培养基上挑取单克隆少量菌体为模版进行PCR,如果包含长入片段则PCR产物大小为引物距插入位点的距离加上插入片段的大小,否则则只有小于200bp的载体自连扩增片断
冉温易4879提取的大肠杆菌质粒里面含有基因组DNA(按照碱法大提质粒)该怎么办?如果没有补救的办法,重新提取应该注 -
谈怪茅13338049118 ______ 可以考虑切胶回收,如果你的质粒在10k以下,污染的基因组DNA量不多,而且基因组DNA弥散不严重的话,在1%的agarose胶里质粒和基因组DNA还是分得比较开的. 注意的地方是在加完溶液2裂解细胞的时候要放置在冰上而且时间不能太长,加溶液2以及下一步加溶液3中和时,混合要充分但要轻柔,一般小心颠倒5-10次即可.
冉温易4879这个提质粒DNA的原理是什么? -
谈怪茅13338049118 ______ 这些东西后面都灭活了,不影响你后面的实验,应该没关系zltj2008(站内联系TA)这应该不是正规专门提质粒的方法,这种方法就是把菌体裂解开,把包括基因组DNA和质粒DNA都释放出来,电泳时应该都可以看到,然后可以做PCR检测或酶切.我印象中,这种方法应该算是构载体时的快速验证用的,比你常规提质粒后酶切或PCR什么的能省点时间.chenguestc(站内联系TA)原理跟常规试剂盒是一样的,都是先裂解菌,再使蛋白和DNA分离. 这跟菌落PCR的想法差不多,只不过多了这么一步裂解细菌细胞的步骤.