溶解曲线和扩增曲线

危祝桂3311实时定量PCR的曲线图怎么看?包括标准扩增曲线,目的基因熔解曲线,目的基因的扩增曲线,都怎么看?三个曲线各有什么意义? -
尹劳全17687737622 ______[答案] 先看目的基因熔解曲线,如果只有一个尖锐的锋,而且不是很低温度下出来的(那时Dimer),说明这对引物可以用,这时看Ct值才有意义.标准扩增曲线看Ct值得间隔是否均匀,一般10倍稀释间隔3.3个ct值,同时要保证你的目的基因...

危祝桂3311如何分析定量pcr 溶解曲线 -
尹劳全17687737622 ______ 可以看看有几个峰,以及峰出现的位置.每个峰代表有一种产物,如果有两个峰甚至多个峰,说明引物不特异,你得到的Ct值是不可信的.还有如果出现峰的温度低,很可能是Dimer,而不是你的目的产物.如果你相同样品各管的溶解曲线都只有一个尖锐的峰,而且不是Dimer,说明你的扩增的产物是稳定正确的,数据可以采用.它只是反映PCR完后,产物的情况,不能得出Ct值.

危祝桂3311荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
尹劳全17687737622 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关

危祝桂3311实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温 -
尹劳全17687737622 ______ 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的. 1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐变化的...

危祝桂3311定量PCR法中,Taqman探针法需要做溶解曲线吗?为什么?
尹劳全17687737622 ______ 正常情况下是不需要的,溶解曲线是在SYBR Green法中利用染料在DNA解链时释放不发射荧光,而在DNA双链时与其结合发射荧光的原理制作溶解曲线的,而Taqman探针在PCR反应时其寡核苷酸链由于被DNA聚合酶的外切酶活性给切断,所以不能重新再结合故不能形成探针,所以不需要做溶解曲线.再一个,溶解曲线只是为反应体系中判断是否有非特异性扩增提供一个侧面的依据,适用于染料法.而探针法的特异性很高,从这方面来看也是不需要的.

危祝桂3311溶解度曲线的变化规律 -
尹劳全17687737622 ______ 1.大多数固体物质的溶解度随温度升高而增大,曲线为陡升型,如硝酸钾. 2.少数固体物质的溶解度受温度的影响很小,曲线为缓升型,如氯化钠. 3.极少数固体物质的溶解度随温度的升高而减小,曲线为下降型,如氢氧化钙.Ca(OH)2 4.气体物质的溶解度均随温度的升高而减小(纵坐标表示体积),曲线也为下降型,如氧气.

危祝桂3311求助,NCBI设计的引物怎么看好不好 -
尹劳全17687737622 ______ 可以用于正式实验的引物必须满足以下条件: a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的...

危祝桂3311PCR扩增效率与什么有关(扩增效率,澹醮 -
尹劳全17687737622 ______ 主要考虑是否在模板稀释过程中出现问题,是否存在高浓度样品污染低浓度样品的情况.具体的要看了你的扩增曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断.其次题主提到的两个问题1、模板浓度过高会抑制PCR反应,可能会导致扩增效率降低.但同时可能会出现非特异性扩增导致结果的Ct值不可信,最终导致扩增效率不可信.2、在一定范围内提高退火温度不会太影响扩增效率.

危祝桂3311什么是PCR熔解曲线法 -
尹劳全17687737622 ______[答案] PCR熔解曲线分析法是做realtime-pcr时分析,用来确定不同的反应产物,包括非特异性产物的分析方法.原理是在扩增反应完成后,通过逐渐增加温度的同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线,随着反应中双链DNA变性,荧光染料又回复到游离...