真核表达载体入核序列
一、背景介绍：抗性基因（resistant gene）
(1) 在质粒图谱中的AmpR、KanR等表示质粒载体中的筛选标签，多为抗生素抗性基因，方便后续通过抗生素筛选阳性克隆。
(2) 抗生素兼具了成本低廉、易操作、可控制等优点。
(3) 只存在单抗性的质粒多为原核克隆载体和原核表达载体。
(4) 存在两种或以上的抗性的多为穿梭质粒。
(5) 抗性基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否，如果抗性基因成功导入并表达基因，那么该生物就具有相应的抗性，据此判断基因表达载体是否成功导入细胞内。
(6) 在分子生物学实验中常用存在于质粒上的抗性基因，如抗四环素基因，将目的基因接到含该标记基因的质粒上，再将重组质粒导入受体细胞。理论上，受体细胞(如大肠杆菌)就对四环素表现抗性，当实验员用选择培养基(比如含有四环素的培养基)来培养受体细胞时，能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功地导入了重组质粒，这样，成功导入重组质粒的细胞就被选择出来。
二、抗生素储存液常用品种有哪些
(1) 常用原核抗性
抗生素 | 英文名 | 英文缩写 | 贮存浓度(mg/ml) | 工作浓度(mg/L) | 保存条件 |
氨苄青霉素 | Ampicillin | Amp | 100 | 100 | -20℃ |
卡那霉素 | Kanamycin | Kan | 50 | 50 | -20℃ |
氯霉素 | Chloramphenicol | Chl | 25 | 25 | -20℃ |
壮观霉素 | Spectinomycin | Spe | 100 | 100 | -20℃ |
四环素 | Tetracycline | Tet | 10 | 50 | -20℃ |
链霉素 | Streptomycin | Str | 50 | 50 | -20℃ |
庆大霉素 | Gentamicin | Gen | 50 | 50 | -20℃ |
硫酸安普霉素 | Apramycin sulfate | Apr | 25 | 25 | -20℃ |
红霉素 | Erythromycin | Ery | 100 | 600 | -20℃ |
利福平 | Rifampin | Rif | 50 | 50 | -20℃ |
头孢噻肟钠 | Cefotaxime sodium | Cef | 50 | 50 | -20℃ |
羧苄青霉素钠 | Carbenicillin | Car | 50 | 50 | -20℃ |
(2) 常用真核抗性
抗生素 | 英文名 | 英文缩写 | 贮存浓度(mg/ml) | 工作浓度(mg/L) | 保存条件 |
新霉素 | Neomycin | Neo | 100 | 100 | -20℃ |
嘌呤霉素 | Puromycin | Kan | 50 | 50 | -20℃ |
潮霉素B | Hygromycin B | Hyg | 50 | 50 | -20℃ |
博来霉素 | Zeocin/blemycin | Zeo/ble | 100 | 100 | -20℃ |
杀稻瘟菌素 | Blasticidin S | Blast | 10 | 75 | -20℃ |
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司姜侧3366真核载体构建目的基因没有突变,载体插入了一个碱基有什么影响 -
方岩仇18019567415 ______ 真核载体构建目的基因没有突变,载体插入了一个碱基有什么影响1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件;2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要.3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.
司姜侧3366真核表达载体与染色体能整合吗 -
方岩仇18019567415 ______ 不是整个重组载体都跟染色体整合.目的基因是否整合到染色体上,要看你是怎么设计这个质粒的.如果质粒上目的基因的两端有与染色体上相同的同源序列,就可以整合到染色体上.如果没有同源序列 的话,就没法整合到染色体上.在酵母细胞中,有时候也可以转一个质粒进去表达蛋白,不整合到染色体上.动物细胞里能不能我不知道.
司姜侧3366载体构建时,如何区分质粒是真核表达还是原核表达,二者的启动子分别有哪些? -
方岩仇18019567415 ______ 这个做你就有点盲目了,我觉得你应该先确定你要原核表达,还是真和表达,确定后,在选择质粒.正如你所说载体是可以构建的,所以质粒作为载体,其启动子也是可以构建的,,现在实验室往往自己构建所需要的载体进行表达,就是我需要什么样的质粒,我就构建什么样的质粒. 明白哇.质粒的启动子不同之处在于原核和真核表达体系的不同,他们是特异针对不同的表达方式去构建的,有好多呢
司姜侧3366如何选择合适的表达载体 -
方岩仇18019567415 ______ 首先,你得先确定这个3.4kb的基因是需要在原核还是真核表达系统中表达; 其次,选择好相对应的表达系统后,再考虑这段基因的表达产物(即蛋白)最后是否需要附加上标签(tag)以用于后续的分离纯化,以及这个标签是加在C末端还是N末端等. 最后,根据你的实验目的确定你所需要的表达量,是采用一个含有强启动子的载体来过量表达蛋白,还是只需要一个普通的启动子即可. 我建议你先根据上述原则初选出一些载体,然后找到这些载体的使用说明书(直接在网上找),里面有非常详细的说明,包括启动子信息、多克隆位点信息、载体使用范围、表达条件等.
司姜侧3366请问:真核生物的基因在原核生物基因进行表达时的注意事项 有哪些? -
方岩仇18019567415 ______ 你是问基金组构建吗?应该是内切酶最重要了,然后是温度、PH等理化条件.步骤好像是质粒选择、内切酶的选择、酶切、连接酶的连接、基因的表达了吧.
司姜侧3366原核表达载体序列如何分析,从哪个启动子开始翻译分析? -
方岩仇18019567415 ______ 简要的说,pet系统的T7启动子最著名,以pet系列来说,找到启动子之后,再找rbs区域,这个是核糖体结合区,找到了之后,从离rbs最近的一个Met开始翻译,3个碱基为一个读码框,遇到UAA,UGA,UAG之后翻译结束,载体一般都由终止密码子,有时候也在引物里人为添加终止子,还有不明白的可继续问,
司姜侧3366真核表达载体能在大肠杆菌中表达吗 -
方岩仇18019567415 ______ 这要看载体是否具有原核启动子了.一般的真核表达载体都是穿梭载体,载体上的氨苄青霉素等抗性基因就是可以再原核生物中表达的.但是你连接在载体上的真核基因是不会在原核生物中表达的,因为基因前边只有载体上的真核启动子,而且可能基因里面也会有内含子.
司姜侧3366怎样获得一个有功能的基因片段 -
方岩仇18019567415 ______ 要让某个基因正常转录和翻译,除了这个基因的CDS以外,还需要启动子,起始密码和终止密码(这两个通常包括在CDS内),polyA加尾信号.如果在真核中表达,最好在起始密码前加一个kozak序列,以增强表达水平. 一般商品化的表达载体通常都含有上述元件,所以你只要把CDS克隆到表达载体就行了.
司姜侧3366真核基因在原核细胞中如何表达 -
方岩仇18019567415 ______ 基因工程操作的过程中,在导入真核细胞的目的基因时一般用人工合成基因的方法.即以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下根据碱基互补原则合成双链DNA,从而获得所需要的目的基因.或根据...
司姜侧3366原核表达载体的介绍 -
方岩仇18019567415 ______ 原核表达载体,能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体.