细胞凋亡的表现
细胞凋亡检测可以：（1）用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；（2）应用 于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治 疗；（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
1、实验方法和原理
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一 是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一 种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂 分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。
Annexin V 是一种 Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血 管蛋白，Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性。对 PS 有高度的亲和性。因此， 该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。
PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差 别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。 因此，可以建立一种用 Annexin V 结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除 试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。
2、实验材料、试剂、仪器和耗材
细胞；HEPES 缓冲液、NaCl、CaCl2、PI、ANNEXIN V-FITC 试剂盒； 流式细胞仪。
3、实验步骤
一、试剂与仪器
1. 孵育缓冲液：10 mmol/L HEPES/NaOH，pH7.4，140 mmol/L NaCl，5 mmol/L CaCl2。
2. 标记液：将 FITC- Annexin V（宝灵曼公司产品）和 PI 加入到孵育缓冲液中，终浓度均 为 1 ug/ml。
3. 流式细胞仪。
二、实验步骤
1. 细胞收集：悬浮细胞直接收集到 10 ml 的离心管中，每样本细胞数为（1~5）×106/mL500~1 000 r/min 离心 5 min，弃去培养液。
2. 用孵育缓冲液洗涤 1 次，500~1 000 r/min 离心 5 min。
3. 用 100 ul 的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育 10~15 min。
4. 500~1 000 r/min 离心 5 min 沉淀细胞孵育缓冲液洗 1 次。
5. 加入荧光（SA-FLOUS）溶液 4℃下孵育 20 min，避光并不时振动。
6. 流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用 488 nm，用一波长为 515 nm 的通带滤器 检测 FITC 荧光，另一波长大于 560 nm 的滤器检测 PI。
7. 结果判断：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如 PI 有抗染性，坏死细胞则不能。 细胞膜有损伤的细胞的 DNA 可被 PI 着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会 有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期 PI 不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞 与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右 上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（FITC+/PI-）。
","gnid":"943661448cb91d27c","img_data":[{"flag":2,"img":[{"desc":"","height":"618","title":"","url":"https://p0.ssl.img.360kuai.com/t01c759a0a8801be042.jpg","width":"1440"}]}],"original":0,"pat":"art_src_0,fts0,sts0","powerby":"cache","pub_time":1706511915000,"pure":"","rawurl":"http://zm.news.so.com/cc53bc4c6f7a1a84b4f971d72b865c75","redirect":0,"rptid":"3518a02a97218d3e","rss_ext":[],"s":"t","src":"北京德航五洲生物科技有限公司","tag":[{"clk":"kscience_1:细胞","k":"细胞","u":""},{"clk":"kscience_1:pi","k":"pi","u":""}],"title":"细胞凋亡检测实验（Annexin V&PI双染色法）
屈影施3920细胞凋亡和细胞坏死的区别 -
苏所泰13421591529 ______ 一般认为程序性细胞衰老凋亡是一种利他性、生理性细胞死亡,即局部、个别的死亡有利于整体或种群的存活.细胞凋亡时的形态特征是 1.细胞变成圆球状、细胞外膜鼓起成腔泡,细胞核膜和细胞的一些内部结构破裂,细胞核内的染色体DNA被酶切成断片; 2.当细胞破裂成碎片之前细胞膜不破裂,引起细胞内容物不泄漏出来,不引起炎症反应; 3.细胞碎片被周围的活细胞吞噬,而不是被专职的巨噬细胞清除. 而细胞坏死则是细胞受到急性损伤而出现的、病理性的死亡,表现为: 1.细胞胀大,释放出大量内含物,引起炎症 2.坏死细胞最终被巨噬细胞清除.
屈影施3920细胞死亡之前 会有撒表现啊 ?? -
苏所泰13421591529 ______ 细胞死亡分几种: 1.坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程.表现为细胞胀大,胞膜破裂,细胞内容物外溢,核变化较慢,DNA 降解不充分,引起局部严重的炎症反应. 2.细胞凋亡 首先出现的是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离,然后是细胞质密度增加,线粒体膜通透性改变,释放细胞色素C到胞浆,核质浓缩,核膜核仁破碎,DNA降解为片段;胞膜有小泡状形成,最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体,无内容物外溢,因此不引起周围的炎症反应,凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬. 这些只是形态学特征,想仔细研究的话可以去http://baike.baidu.com/view/24139.htm 看看
屈影施3920细胞焦亡和细胞凋亡的区别 -
苏所泰13421591529 ______ 1、定义 细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是一种程序性细胞死亡. 细胞凋亡(apoptosis)指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡. 2、表现 细胞焦亡表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂,导致细胞内容物的释...
屈影施3920细胞凋亡的概念、形态特征及其坏死的区别是什么 -
苏所泰13421591529 ______ 细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡.细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用;它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象...
屈影施3920什么是细胞凋亡?如何检测?表观遗传修饰在细胞凋亡中的作用? -
苏所泰13421591529 ______[答案] 细胞凋亡(apoptosis)是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程. 关于检测方法,这是我在期末考试自己总结的,并不是从网络上贴过来的! 1,形态观察 坏死细胞:细胞膨胀,细胞质膜裂解,细胞器膨大,...
屈影施3920细胞凋亡的定义,生物学特征和生物发育中的作用,正常新城代谢的过程 -
苏所泰13421591529 ______[答案] 有积极的意义. 细胞凋亡是指为了保持一个稳定的环境,自组装成由基因控制的细胞死亡.细胞凋亡和坏死,细胞凋亡是一个被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活和表达以及调控的作用,这是不是一种病态的条件下,自体损伤的现象...
屈影施3920细胞坏死属于细胞凋亡的具体表现 这句话对吗? -
苏所泰13421591529 ______[答案] 细胞凋亡像人尾骨和人的指缝连接处的细胞消失,基因就决定他要消失
屈影施3920 试着分析细胞衰老和细胞凋亡的区别? -
苏所泰13421591529 ______[答案] 两者都是一种正常的生命现象.但细胞衰老的过程是细胞的生理状态和化学反应发生复杂变化的过程,最终表现为细胞的形态、结构和功能发生变化.细胞凋亡是受到严格的遗传机制决定的程序性调控.
屈影施3920何为细胞凋亡?它与细胞坏死有什么区别 -
苏所泰13421591529 ______ 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似,但它们的过程与表现却有很大差别.坏死(necrosis):坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程.表现为细胞 胀大,胞膜破裂,细胞内容物外溢,核变化较慢,DNA降解不充...