蛋白电泳没有条带原因

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蛋白电泳没有条带原因

来源：baiyundou.net 日期：2024-08-08

蛋白质磷酸化是生物体内最重要的翻译后修饰之一，它涉及到许多生命过程，如细胞周期、信号转导、代谢调控等。体外磷酸化检测作为一种实验技术，对于我们深入理解蛋白质功能和相关疾病的机制至关重要。

1. 什么是蛋白质磷酸化？

蛋白质磷酸化是指蛋白质上的特定氨基酸残基（通常是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸）与磷酸基团结合的过程。这一过程由蛋白激酶促进，并可以通过蛋白磷酸酶进行逆转。磷酸化和去磷酸化的动态平衡，决定了蛋白质的活性、定位和功能。

2. 为什么要进行体外磷酸化检测？

尽管体内蛋白质磷酸化是非常复杂的，但在实验室条件下，我们可以通过体外磷酸化实验模拟这一过程。体外磷酸化提供了一个简化的环境，允许研究者精确地控制实验条件，并直接观察蛋白质的磷酸化状态。此外，体外磷酸化检测可以帮助鉴定特定蛋白激酶的底物，从而揭示信号转导途径的细节。

3. 体外磷酸化实验的基本步骤

1）制备反应混合物:

目标蛋白：通常使用纯化的蛋白作为实验的对象。
活性蛋白激酶：这是催化蛋白磷酸化的酶。
磷酸化供体：通常是γ-32P ATP或γ-33P ATP，它提供放射性标记的磷酸基团。
缓冲液：提供适当的pH和离子强度以维持酶的活性。

2）进行反应:

将上述成分混合在一起，然后在适当的温度下孵育一段时间（例如，30分钟，37°C）以允许蛋白激酶催化目标蛋白的磷酸化。

3）终止反应:

可以通过添加SDS样品缓冲液或通过冷冻来终止反应。

4）分析结果:

电泳：使用SDS-PAGE电泳来分离蛋白。
放射性检测：如果使用放射性标记的ATP，可以使用X光胶片曝光或磷光成像系统来检测放射性信号。
染色：可以使用Coomassie蓝或银染来染色胶以显示蛋白条带，从而确保蛋白的载入量是一致的。

4. 应用领域

体外磷酸化检测的技术已经被广泛应用于多个研究领域。在肿瘤生物学中，研究者使用此技术来了解癌症细胞中的异常信号转导。在药物研发领域，这项技术可以帮助鉴定潜在的药物靶标，以及评估潜在药物对特定蛋白激酶的抑制效果。

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申牵妻3709sds - page电泳 -
蒙邱雅14787779379 ______ 可能有以下几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?...

申牵妻3709SDS电泳后不见条带怎么回事(有泳道,蛋白没有问题,点样没有问题) -
蒙邱雅14787779379 ______ 请问蛋白marker染出来没? 如果maker都没染出来,加上考马斯亮蓝染色液重复使用的话, 八成是染液出问题了,我就遇到过这样的情况, 重新配下染色液,过滤后再染胶试试看. (前提是Loading buffer没问题,蛋白变性没问题,制胶没问题)

申牵妻3709pcr 电泳图什么都没有 -
蒙邱雅14787779379 ______ 造成电泳没有条带的原因是多种多样的,1、mRNA提取是不是成功,有没有降解,(可以稍微取一点跑个电泳或测OD值)2、反转录产生cDNA是不是成功的,就是引物的设计是不是合适3、PCR扩增是的温度是不是合适的

申牵妻3709在用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白时,电泳图谱不清晰的原因有哪些,理论上有几条带,分别是什么蛋白? -
蒙邱雅14787779379 ______[答案] 原因很多.最可能的是样品中蛋白含量较少,染色脱色的配方效果不好,比如染色时间段或者脱色时间长,也有可能是玻璃板没洗干净,还有就是在浓缩胶中没有浓缩好的缘故.

申牵妻3709电泳marker有条带,为什么没有条带 -
蒙邱雅14787779379 ______ 我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题, Tris 8.8 6.8 浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适. 做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适, 电泳缓冲液的浓度,pH有无问题. marker是不是时间太长了.

申牵妻3709PCR电泳,为什么没有条带啊? -
蒙邱雅14787779379 ______ 开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只有一条没有啊...

申牵妻3709PCR无条带,这是什么原因?
蒙邱雅14787779379 ______ 基本上这几个原因1、引物设计有问题,没有发生扩增反应2、退火温度设计错了,没法合成DNA3、反应体系有什么试剂忘了添加,导致没发生反应.4、电泳仪没有工作,条带没有跑开.

申牵妻3709SDS - PAGE电泳时只有标准蛋白不出现条带是什么原因
蒙邱雅14787779379 ______ 看你Marker效果,如果Marker跑出来比较明显,那说明蛋白提取效果不好或者是根本就没提取出来蛋白!如果你Marker效果都不好有可能是你胶配制过程的问题!

申牵妻3709WESTERN BLOT 中NACL过多对蛋白有影响吗?是否会导致没有条带出现?? -
蒙邱雅14787779379 ______ NACL过多不会造成蛋白性变(就算一时变性,但在低盐时会复性).但NACL过多会造成电泳条带变型.跑得慢,难看. 但理论上讲不会导致没有条带出现. 可以在跑完胶时染一下胶看一下. WESTERN BLOT没有条带出现的原因很多的,如DAB显色可能是灵敏度达不到.ECL显色可能是显色系统出问题,可以做一下内参看看.

申牵妻3709PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常. -
蒙邱雅14787779379 ______[答案] 一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loading buffer后加热(90度以上)一下再上样试试. 另外一个原因,你的产物特别大(不一定是目标产物)

（编辑：自媒体）