质粒构建sirna

羿相伟637怎样根据sirna干扰靶序列来构建重组慢病毒载体 -
怀有肯15686174131 ______ 原代细胞较难转染,可以先构建慢病毒,再用慢病毒进行转染. 1.将actin基因,放入慢病毒融合表达载体,与荧光蛋白(GFP)融合表达,注意避免移码突变. 2.然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞,可以用脂质体法,慢病毒配套细胞一般为293. 3....

羿相伟637病毒载体用于siRNA表达的优势是什么?
怀有肯15686174131 ______ 病毒载体也可用于siRNA表达,其优势在于可以直接高效率感染细胞进行基因沉默的研究,避免由于质粒转染效率低而带来的种种不便,而且转染效果更加稳定

羿相伟637质粒的构建过程 -
怀有肯15686174131 ______ 因为高拷贝质粒稳定性低,而且给宿主细胞的压力大. 低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1~2次,而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10~200拷贝. 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid),独立于细菌细胞而自...

羿相伟637质粒DNA在基因工程中的作用 -
怀有肯15686174131 ______ 在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体.人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等.常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101.pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(...

羿相伟637结合PBR322质粒载体构建过程,总结质粒载体的特点和质粒载体构建的原则? -
怀有肯15686174131 ______[答案] 基因载体的条件;一、能自主复制或随受体细胞染色体DNA一起复制.二、易于鉴定和筛选.三、限制酶对其作用的切割点少.四、易与引入受体细胞. 质粒 是细菌染色体外的小型环状双链DNA,质粒可以自我复制,而且质粒上有多个限制性内切酶的酶...

羿相伟637做RNA干扰实验,用人癌细胞相关基因,siRNA用什么方法合成合适? -
怀有肯15686174131 ______ 用试剂盒.我现在用Promaga公司的T7 RiboMAX Express RNAi System就可以合成siRNA和dsRNA.50次的是3000多块钱吧.有DNA摸板就可以何成.

羿相伟637如何利用慢病毒载体构建稳定表达外源基因的细胞系不是表达荧光蛋白的那种 -
怀有肯15686174131 ______[答案] 1.将外源基因插入慢病毒载体 2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞 3.收集病毒液 4.用病毒液感染靶细胞 5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法 6.获得稳转株 《c-Met基因siRNA慢病毒表达载体的构建及...

羿相伟637什么叫重组腺病毒质粒 -
怀有肯15686174131 ______ 就是序列数据经过拼接后得到了完整的质粒全序列 闪晶分子生物科技有限公司,座落在漕河径开发区(原址:上海生物工程研究院),是专业从事生物技术服务的公司;公司拥有一批知名度较高的学科带头人和一支训练有素、多学科配合、以中...

羿相伟637(2014•金山区一模)图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组... -
怀有肯15686174131 ______[答案] (1)质粒切割前是双链环状DNA分子,所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键,故不含游离的磷酸基团.从图1可以看出,质粒上只含有一个SmaⅠ的切点,因此被改酶切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割...

羿相伟637目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图所示.(1)构建人... -
怀有肯15686174131 ______[答案] (1)质粒上的抗性基因可作标记基因,便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.(2)在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点,即目的基因两侧有-GAATTC-,目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端为.(3)DNA连...