质粒的提取和鉴定实验报告

康丁项3016如何判断一个细菌是否含有质粒? -
禄炭新15927153390 ______ 金标准:提取质粒DNA,电泳检测到质粒特有的3条带,便可判断为含有质粒.否则是空的.最好用一个已知含有质粒的菌株进行质粒DNA提取,确保提取方法正确.

康丁项3016细菌细胞中,染色体DNA和质粒DNA在质粒提取过程中发生了什么变化?该变化对质粒检测和分离有什么利用价值 -
禄炭新15927153390 ______ 碱性条件下,染色体DNA双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键断裂但两条互补链彼此缠绕.恢复中性时,染色体DNA难以复性,质粒DNA分子很快复性,离心时染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来,而质粒DNA则留在上清液中.

康丁项3016质粒的提取方法是什么?
禄炭新15927153390 ______ 8、取上清液,加入50mlRNA酶A(10mg/ml),37℃水浴20分钟

康丁项3016质粒DNA的提取过程中染色体的去处和原理是什么 -
禄炭新15927153390 ______ 首先加入溶液1,:改变细胞膜的通透性. 加入溶液2:使细胞裂解,释放出质粒DNA和染色体DNA,在碱性条件下,破坏碱基配对,使这两种DNA都变性. 加入溶液3:使DNA分子复性.此时,线状染色体DNA的两条链已经全部分开,不会再复合.而质粒DNA,由于处于拓扑缠绕状态而彼此不分开,你可以想象一下,两个环分开之后也是环环相套的情况.所以质粒DNA能够很快的找到自己相对应的那条链,因此在最适条件下,便可复性. 此时,已经完全分开的线状染色体DNA交联形成不溶于水的线团结构,缠绕附着在细胞壁碎片上,通过离心可去除. 而质粒DNA则留在上清中,通过异丙醇沉淀以及70%乙醇洗涤后便可得到.

康丁项3016重组质粒双酶切鉴定 -
禄炭新15927153390 ______ 既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了. 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题. pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常. 换句话说,你的实验一切正常,那条500bp的条带可能本来就应该那么淡.

康丁项3016质粒提取的11个为什么 -
禄炭新15927153390 ______ 1.溶液I—溶菌液:溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁(cell wall)的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用.当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制.葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械...

康丁项3016影响质粒提取的因素有哪些?与之相对应解决的办法是什么 -
禄炭新15927153390 ______ 一,要有黏性末端 二,要有标记基因 三,要能在工程菌细胞内大量复制

康丁项3016质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同 -
禄炭新15927153390 ______ 不同点 一、提取方法不同 DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法.化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法.生物方式:酶法. 质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,...

康丁项3016从大肠杆菌中制备少量质粒的流程就是一个实验简述或是论述形式的答案 -
禄炭新15927153390 ______[答案] 大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法: 碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析...

康丁项3016怎么对提取质粒进行鉴定? -
禄炭新15927153390 ______ 首先跑一个琼脂糖凝胶电泳,观察一下带型和大小是否符合,然后根据质粒所含有的酶切位点,选择合适的限制性内切酶进行单酶切或双酶切,观察酶切后的条带数和大小是否与理论一致.