质粒转染的说明书

宋非纯33541.质粒是基因工程中最常用的运载体,它存在于许多细菌体内.质粒上有标记基因如图所示,通过标记基因可以
宣童庾17360682212 ______ 所谓标记基因,一般都是抗生素耐药基因.这样凡是转染了质粒的细菌都可以在含抗生素的培养皿上生长.从而起到筛选的作用.

宋非纯3354如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 -
宣童庾17360682212 ______ 如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA. 两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周). 另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.

宋非纯3354质粒浓度低怎么转染1ug -
宣童庾17360682212 ______ 建议重新提取~减少洗脱体积~质粒浓度合适为止~也可以加大转染体积~

宋非纯3354用jetPRIME和Lipo3000转染293T细胞,哪个效果更好? -
宣童庾17360682212 ______ 脂质体的转染毒性是最大的,很明显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的.对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量,我一般做转染,对于任何细胞,只要是12孔板,一般都是用1ugDNA,这个量绝对够了.,因为质粒转...

宋非纯33543T3 - L1细胞转染质粒之后多长时间提RNA蛋白?3T3 - L1细
宣童庾17360682212 ______ 一般转染后6小时就可以观察荧光了,如果时间间隔太长,会导致了荧光淬灭;也有可能荧光自身比较弱,可以选择72h后蛋白水平检测,毕竟观察荧光效果只能作为一个参考.

宋非纯3354质粒提取时,为何要去内毒? -
宣童庾17360682212 ______ 若做转染,需要去内毒素,因为内毒素会对细胞造成伤害,严重的甚至杀死细胞.在提取质粒的过程中,可能会残留有细菌(如大肠杆菌)产生的内毒素,虽然有时可能内毒素含量很少,但为了以防万一,若做转染,一般都要去内毒素.

宋非纯3354转染时质粒怎么定量 -
宣童庾17360682212 ______[答案] 质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.

宋非纯3354感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理 -
宣童庾17360682212 ______ 制备(复制的~)1.将冻存的菌种1:100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养. 2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h. 3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4000rpm下离心10min收集菌体. 4.弃上清,...

宋非纯3354想用荧光标记一个蛋白,把蛋白弄进细胞,怎样做?或看什么文献?任何线索都可以 -
宣童庾17360682212 ______ 把荧光蛋白连到目的基因的N端或者C端,然后克隆到表达载体中,再转染进细胞. 看pEGFP质粒的说明书就可以.

宋非纯3354OPTI - MEM进行贴壁细胞培养的实验方法是什么? -
宣童庾17360682212 ______ 无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质,本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料,步骤、个人经验以及问题分析. 贴壁细胞的脂质体转染 一、实验材料 1、宿主细胞CHO(贴壁细胞) 2、脂质体...