质粒pcr模板浓度

毛石王3576PCR注意哪些细微操作? -
连桦初15626866565 ______ 1.引物的设计是否合适:一对引物的Tm值最好比较接近,引物错配,形成茎环尽可能少;2.模板的浓度要合适,具体的浓度数值在分子克隆上有(我记不清了),基因组,质粒或是RT产物;3.最好有个正对照组和负对照组,监测你的PCR体系是...

毛石王3576质粒拷贝数我现在计算出制备实时定量PCR标准曲线的质粒浓度为3.028*1011(10的11次方),但是在设置程序时如何换算成:E+? -
连桦初15626866565 ______[答案] 3.028*1011(10的11次方)就是3.028E11 E就是10的几次方的意思.

毛石王3576T4连接后对其质粒PCR条带不亮,为什么?酶切没有条带,是否连接上? -
连桦初15626866565 ______ 很显然你的质粒没有构建成功.感觉是连接出了问题,pBI121载体很大,回收比较困难,建议你测一下回收后的浓度.如果太低的话,建议加大酶切量.121载体至少应该达到50-100ng,然后再按1:3-10摩尔比加入小片段. 至于PCR验证出现假阳性,太正常了.还是酶切比较靠谱.

毛石王3576根据DNA marker 在凝胶电泳中条带亮度,测定目的质粒的浓度,这个方法靠谱吗? -
连桦初15626866565 ______ 在同一块胶中,同样的反应体系(模板浓度,dNTP浓度,PCR反应程序等等)的不同样本,如果胶带亮度不一致可以认为二者浓度有差异.这就是半定量PCR.精确定量需要用到realtime

毛石王3576PCR问题? -
连桦初15626866565 ______ PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失. 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因...

毛石王3576pcr产物与t载体连接体系怎么设定,模板浓度约10ng每位peg,t载体、连接酶该加多少,是怎么设定的为什么? -
连桦初15626866565 ______[答案] 与T载体连接很容易的,不用考虑那么复杂的因素 只要你回收的PCR产物电泳后能看到带,连接基本都能成功

毛石王3576基因组为何PCR 不出条带,测出的浓度为4480ng/ul 基因组PCR和片段质粒PCR一样吗 有什么区别 比如引物量和模板量、温度等等 -
连桦初15626866565 ______[答案] 模板浓度足够了. 你的体系是否正确? 降低退火温度试试.

毛石王3576PCR的引物怎样设计, -
连桦初15626866565 ______[答案] PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否. 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构.如这个区...

毛石王3576PCR的引物怎样设计,过程是怎样的?寻求详细答案.谢谢! -
连桦初15626866565 ______ PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否. 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构...

毛石王3576PCR产物TA克隆,PGEM - T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大? -
连桦初15626866565 ______ 那得看你用多少浓度的胶跑,如果用1%的琼脂糖电泳30min,你的主带(超螺旋的闭环质粒DNA)会在3Kb-2Kbmarker之间,如果是单酶切产物,则应该在3.5kb的marker附近.