qpcr模板浓度太高

汪霄贩4716荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办 -
任呢项18226417447 ______ 1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比. 2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明. 3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析.

汪霄贩4716为什么pcr会有不同程度的拖尾,而且每次拖尾大小不同? -
任呢项18226417447 ______ 模板浓度太高了,把模板稀释10倍,100倍试试看,可以找到最合适的浓度,或者减少扩增的循环数,减个10个循环

汪霄贩4716DNA测序图 当有一杂峰位于两个峰之间为,怎么判断 -
任呢项18226417447 ______ 模板上样量太高了,导致测序原始信号太强,就会出现夹峰.把浓度稀释后重跑或者降低模板加样量重新做测序PCR就可以了.有时候不降低模板量直接反向测序也可以

汪霄贩4716可以直接用阳性菌提取质粒做荧光定量吗 -
任呢项18226417447 ______ 没必要吧,DMT本身就是工程菌了.你做点突变,也就是以他为模板,量需要的很少的.即使是低拷贝质粒,经过质粒提取,这浓度是足够做pcr模板了,建议你把质粒再稀释100-1000倍做模板,否则浓度太高,影响pcr效率和点突变特异性.个人见解,仅供参考,祝愉快!

汪霄贩4716一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 -
任呢项18226417447 ______ 一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2*的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以.由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于...

汪霄贩4716扩增曲线很快就达到了平台期,怎么回事 -
任呢项18226417447 ______ 模板浓度太高或者酶、dNTPs太少,导致很快体系中原料耗尽,达到平台期

汪霄贩4716荧光定量PCR扩增曲线基线过高什么原因 -
任呢项18226417447 ______ ROX加多了,终浓度太高?或者模板量,PCR扩增效率低下?

汪霄贩4716聚合酶链式反应的反应准备有哪些呢?
任呢项18226417447 ______ 模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制缓冲液的成分最为复杂,除水外一般包括四个有效成分:缓冲体系,一般使用HEPES或MOPS缓冲体系;一价阳离子,一般采用钾离子,但在特殊情况下也可使用铵根离子;二价阳离子,即镁离子,根据反应体系确定,除特殊情况外不需调整;辅助成分,常见的有DMSO、甘油等,主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构聚合酶链式反应PCR引物设计PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物

汪霄贩4716以质粒作为模板,pcr出现拖尾现象,为什么? -
任呢项18226417447 ______ 没有具体描述,只能给出几个猜测. 你先看看marker跑得好不好. marker也不好的话: 1.跑胶时电压太高 2.染料问题 3.胶没做好 如果marker没有问题的话: 1.loading buffer 可能有细菌污染 2.pcr问题

汪霄贩4716qpcr提高引物的浓度,扩增效率怎么变 -
任呢项18226417447 ______ qpcr提高引物的浓度,扩增效率怎么变 Ct= -k lgX0+ b(线性方程)用这个方程可以通过Ct值算出样品的起始浓度 斜率=-1/lg(1+e) 扩增效率E=1, 斜率=-3.32 扩增效率范围:90%-110% 斜率范围:-3.1和-3.59之间 △△Ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式,用于比较不同样品之间的差.