转染前为什么要换液

桓发全833如何去除转染后悬浮细胞中的死细胞 -
台拜雄13664747822 ______ 如何去除转染后悬浮细胞中的死细胞 将培养瓶竖立放一段时间(50min左右),然后用吸管轻轻吸取上面1ml的细胞悬液,移入另一个新的已加培基的培养瓶中. 或者ficoll分离,就像分离PBMC一样,先把细胞混匀,然后小心缓慢地把细胞加入到ficol中,1000g离心20分钟,收集位于ficoll和培养基之间的透明层,即为你的活细胞,这是在存在大量死亡细胞的时候采用,如果死亡细胞不是特别多的话,换液勤一点. (仅供参考)

桓发全833慢病毒感染细胞的时候是要换成无血清培养基吗 -
台拜雄13664747822 ______ 慢病毒感染细胞的时候是要换成无血清培养基 常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染).前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析.一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测.

桓发全833细胞换液是否需要用PBS清洗? -
台拜雄13664747822 ______ 那就要看实验要求严不严了. 需要将细胞用作他途,比如拿去做转染、提蛋白等,这就需要将细胞用PBS清洗,但也不是必须,得看情况.一般细胞换液,可以不用PBS清洗.

桓发全833293t细胞转染细胞密度分低了怎么办 -
台拜雄13664747822 ______ 细胞密度太大,最好在30-50%,293T细胞长得很快,蛋白多,不用担心蛋白数量.磷酸钙会在培养皿底部形成颗粒状沉淀,一般来说,颗粒越小,数量越多,转染效果越好.你可以做个氯化钙浓度梯度,检测产生沉淀的效果,以及蛋白表达情况.转染时最好用无血清培养液,培养液数量要少,6厘米培养皿1.5ml足够.数小时后换成正常培养液,大约24小时后收获蛋白样品.

桓发全833lp2000脂质体转染后一定要用无血清培养基培养6个小时换液吗?是不是血清能分解脂质体? -
台拜雄13664747822 ______[答案] 我的培养基都加了青链霉素,转染后是不是不能用博凌科为由于脂质体转染对细胞4-6小时换液用无抗生素的,可以24后再换用含抗生素培养基

桓发全833转染细胞时opti加多了会怎样 -
台拜雄13664747822 ______ opti是无血清培养基,如果是癌细胞之类比较皮实的细胞好像没什么关系的,转染时间差不多了早点换液就行.

桓发全833我想做完细胞转然后,再做个ELISA检测.把细胞铺在96板,转染成功后24小时,直接吸取细胞液做ELISA检测. -
台拜雄13664747822 ______ 除非蛋白质带有信号肽能分泌到细胞外,不然做ELISA之前都需要裂解. 转染试剂的说明书上应该都有写怎么进行转染及其前后期处理,有很多转染试剂中间都不需要换液的,对转染结果没什么影响.

桓发全833更换无血清培养基后细胞大量死亡的问题 -
台拜雄13664747822 ______ 会不会有可能是细胞状态不好,在面临脂质体转染的压力时容易死亡.转染完四至六小时换液了没?另外可能是培养基配制时间较长,谷氨酰胺分解了,那就要补加谷氨酰胺.

桓发全833质粒转染细胞 细菌污染 为什么 -
台拜雄13664747822 ______ 一般质粒提取最后的时候注意一下,用灭菌水和无菌的EP管,管口过火,质粒提取后如果要检样,用无菌枪头.转染完成之后,换培养液的时候要加双抗的培养液. 注意这些一般不会有问题.

桓发全833制片染色前为什么要进行固定?固定时应该注意什么问题? -
台拜雄13664747822 ______ 你说的太高深了,上面那位应该没到那个程度吧 如果实施做临时装片的话,注意方式气泡产生应该是首要问题吧,其次动物细胞要加生理盐水,防止细胞破裂,植物细胞就加水就行了,因为有细胞壁的支撑嘛.然后先别将水吸干,在一侧滴上染...