转染sirna

苍牧荔4497求助做SiRNA质粒转染,效率低转染后细胞状态差 -
鲁炎石15824394413 ______ 做SiRNA质粒转染,效率低转染后细胞状态差 实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题.我觉得只要是注意以下2点就可以了:1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套.2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的.无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大.

苍牧荔4497真核质粒转染与脂质体转染有什么不同? -
鲁炎石15824394413 ______ 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA. 两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周). 另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.

苍牧荔4497如何转染miRNA inhibitor到细胞 -
鲁炎石15824394413 ______ 我觉得你是弄错东西了吧 siRNA和miRNA是类似的 都是用来沉默靶基因的表达 不同的是miRNA是一个调控多个 而siRNA是一个只调控一个 你可能遇到的实验是先验证miRNA通过调控几个基因达到某种效果 然后单独转这几个基因的siRNA 看是否有这种效果 以.

苍牧荔4497转染siRNA后细胞很快长满怎么办 -
鲁炎石15824394413 ______ 因为脂质体会有一些毒性,也可能跟你的细胞状态有关系,如果确认细胞没问题的话,可以换成纳米材料的试剂试试,纳米的毒性小

苍牧荔4497转染micrornamimics之后靶基因mrna会降低吗
鲁炎石15824394413 ______ 转染microrna mimics之后靶基因mrna会降低microRNAs(miRNA)是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经...

苍牧荔4497细胞污染了会死吗 -
鲁炎石15824394413 ______ 那得看被什么污染,污染的程度.就像人,生活的水被污染了,可能会死(污染物有较强毒性),也可能不会死(大多数情况是不会死)

苍牧荔4497有哪些方法可以将sirna导入细胞内 -
鲁炎石15824394413 ______ RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能.成功的进行RNAi 的问题在于使siRNA导入细胞,将sirna导入细胞内常见的方法是 将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs.或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞.此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达.

苍牧荔4497colo205的转染问题有人养过colo205吗?我要做shRNA方面的研究,想通过脂质体把shRNA转到colo205中,但是由于它是半悬浮细胞,我对转染效率以及转... -
鲁炎石15824394413 ______[答案] 把siRNA带个荧光标记,然后细胞内源表达另一种颜色的荧光蛋白,这样就可以统计转染效率了,筛选也可以通过这样的荧光来区分

苍牧荔4497质粒转染的转染试剂可不可以用lip2000呢 -
鲁炎石15824394413 ______ 可以的,很常用的.lip2000、effectene都是常用的.这里有个详细转染的方法,见链接.希望能帮到你!

苍牧荔4497NIH3T3细胞转染后筛选 -
鲁炎石15824394413 ______ 一定要做浓度筛选实验.由于生产厂家的不同,生产批次的不同,G418的含量会有较大的差别.虽然NIH3T3这个细胞做转染比较容易的,但是做筛选浓度试验还是非常必要的,我们实验室在做瞬转时RFect-siRNA,在24孔板内设置siRNA梯度实验,每组梯度设置至少2个复孔,转染试剂2-3ul就够了