酶切结果分析

逄委刻5198ARDRA type Ⅲ (三型酶切分析)是什么意思啊?酶切分析还分成很多类型吗? -
阴泻利18296755062 ______ 酶切条带多形性,可分为很多种,有单酶切,双酶切和多酶切.一般的酶切分析都是多酶切.就是选用多种酶切酶,在特定的基因位点对DNA进行酶切

逄委刻5198酶切产物电泳检测无条带这是怎么回事?最近做酶切,出现很奇怪的现象.我四种要酶切的样品,分别进行单酶切和双酶切,结果电泳结果是只有一个可以切出... -
阴泻利18296755062 ______[答案] 建议你做如下改进: 1.原始质粒上样2ul,电泳检测,确定质粒质量没问题; 2.所有酶切体系均改为10ul,其中质粒2ul,酶0.1ul (双酶切时另一种酶也加0.1ul ),buffer终浓度为 1*,剩下为去离子水.酶切时间为4小时左右. 3.电泳用的凝胶最好为新鲜配...

逄委刻5198PCR - RFLP结果如何分析 -
阴泻利18296755062 ______[答案] 你说的是判刑吧?酶切后,跑胶,根据内切切酶的酶切位点,会把扩增的PCR产物切成大小不同的片段,根据片段大小和条数判断基因型

逄委刻5198pcr扩增出的片断正确但双酶切结果却偏大,不只是为什么??请高手指点??? -
阴泻利18296755062 ______ 可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.

逄委刻5198酶切基因型是怎么界定的? -
阴泻利18296755062 ______ 检测基因型要看,你找到的基因座上各种等位基因的差别啦.如果两个等位基因的差别是一个点突变,则你应该寻找这个点突变是否造成新的酶切位点,如果是,则在PCR扩增出含有这个点突变的DNA片断后,用相应的内切酶酶切,根据酶切结果进行鉴定.如果两个等位基因的差别是一段DNA序列的插入,那么你可以之间在这段插入序列的两侧进行PCR,根据PCR扩增片断的大小进行鉴定,而且还可以设计一个引物在插入序列其上,这样只有有插入的等位基因可以PCR出来条带.

逄委刻5198请问PCR中的酶切鉴定程序到底是想鉴定个啥呀?为何用酶切鉴定就可以鉴定出呢?谢谢啦 -
阴泻利18296755062 ______ 其实酶切并不能准确鉴定,而是因为方便成本又低.一般做克隆时在涉及引物时会加入酶切位点,这样PCR后用相应的酶去切产物,大体上可知道产物大小是否符合预期,进一步的鉴定还是要测序

逄委刻5198如何将两个不同酶切点中的片段全部除去 -
阴泻利18296755062 ______ 一般来说,做酶切要求酶切位点的特异性,即是只有单一的酶切位点,这样切下来的片段才是单一的,如果有两个相同酶切位点的话,会影响酶切的,出现的结果可能会有几条不同的条带,因为在两个酶切位点上都会切开,导致片段不特异,所以建议不要采用这个酶切位点组酶切.

逄委刻5198酶切后形成 片段数? -
阴泻利18296755062 ______ 这类题目不难. 最关键的是,要正确找到该酶的酶切位点,即特定的碱基序列.如果,没有酶的酶切位点,那么这种酶就不能对DNA分子起作用. 如果,是环形DNA分子,有几个酶切位点,就会被切成几段. 如果,是线性DNA分子,N种酶去切(都有酶切位点),就会形成(N+1)个DNA片段. ——————————————————————————————————— 对楼上的更正: DNA分子中,碱基之间的键是氢键,不是共价键.断开氢键,根本不需要酶切. 酶切开的是,磷酸基团与脱氧核糖之间的3',5'-磷酸二酯键,而不是什么氢键. 本人,研究生阶段做的就是基因工程. 楼主,如果还有什么不明白的地方,欢迎随时来问.

逄委刻5198如何对PCR扩增的产物进行酶切? -
阴泻利18296755062 ______ Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行酶切.个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了或基因表 型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一 定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性.结果是要么装不上去,要么装上去切不下来,测序发现末端引物碱基少了.正确安全的做法是先通过琼 脂糖电泳回收产物,然后酶切,酶切可以适当提高酶的用量.

逄委刻5198质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来 -
阴泻利18296755062 ______ 质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来 既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了. 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题. pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常. 换句话说,你的实验一切正常,那条500bp的条带可能本来就应该那么淡.