酶切体系有哪些

茅单夏4639对了我想问你一下,你之前说的在送去测序之前进行酶切检测,我想知道你的酶切体系是多少 -
钮定宋19884782868 ______ 我一般检测的酶切体系,10ul,质粒视电泳条带亮弱,一般5ul 单酶切就1ul,双酶切,酶各0.5ul, 若是割胶回收用来连接,我因为之前总是连接转化不长菌斑,所以我都是20ul,4管,最后并一管,割胶回收. 检测10ul足够了,因为如果切了不对,换酶或者扔了,都不心疼....,点样5ul电泳就够了,当然你如果怕条带不亮,也可以全点了

茅单夏4639sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何
钮定宋19884782868 ______ 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充

茅单夏4639sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何sall和Ecorl能双酶切吗?酶切反应体系和条件如何,想做连接来 -
钮定宋19884782868 ______[答案] 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充

茅单夏4639要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少? -
钮定宋19884782868 ______[答案] 因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些....

茅单夏4639如何选择酶切酶极其buffer -
钮定宋19884782868 ______ 不同公司的酶和buffer命名和特性是不完全一样的.像takara公司的内切酶有一个双酶切的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer. 像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了. 其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料.祝你好运.

茅单夏4639质粒dna酶切不完全的可能原因有哪些 -
钮定宋19884782868 ______ 质粒的量以及酶切时间都会有影响1. 质粒DNA的质量2.限制性内切酶的活性3.限制性内切酶的用量

茅单夏4639双酶切总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶 -
钮定宋19884782868 ______ 双酶切怎么老是切不完全需要看具体的体系,质粒的质量,具体的酶 比如 50ul的体系: 酶切片段 43微升 Buffer 5微升 Sal I 1微升 EcoR I 1微升 因为将来要做凝胶回收,体系一定要大,而且不用加水,提出的质粒溶液就直接用于酶切,如果再加水,那样浓度会更低,产量不高. 建议100ul体系加2ul酶,因为1ul酶切不完全.

茅单夏4639全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常
钮定宋19884782868 ______ 你的实验目的和详细步骤没说清楚.我先就现有的描述分析一下: 很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶出了问题.测试一下也很简单,找有酶切位点的质粒来试一下就知道了.看一下缓冲液是否用对了.条件是否正确.这一步的可能性最大.这些酶是你专用的还是公共试剂,公共试剂失活的可能性就更大了. PCR做不出来,你的引物设计位点在哪里?是否是要连接后才能出结果,那除了酶切没有完成外,DNA连接酶出错也是有可能的.

茅单夏4639pcr产物酶切 -
钮定宋19884782868 ______ 体积与质量换算肯定是需要测浓度的.你需要准确计算的话就像楼上说的一样,用紫外分光光度计测DNA浓度.其实酶切的浓度不用算得那么精确,DNA加多了可以多反应一会嘛.你可以通过PCR产物的电泳条带亮度估算一下大致的浓度(与已知浓度的Marker比较),由此算出的DNA浓度用来酶切是没有问题的.

茅单夏4639...旋转使其均匀覆盖,8 - 9h ,37°,培养箱中孵育过夜.9挑菌:10 挑菌结束后,液体培养基放于37°,200r摇6 - 7个小时.11 提取质粒 12酶切 体系为;EcoRI 0.... -
钮定宋19884782868 ______[答案] 不太理解“酶切产物一直是质粒”的意思,是指仍然主要有3条条带吗? 不清楚你的插入片段是不是含有EcoRI 酶切位点,但是pEAZY系列载体不是都含有EcoRI位点的,比如transgen公司的pEASY-Blunt 和pEASY-T1是没有EcoRI的,但是pEASY-T3...