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folin酚试剂中文名

来源:baiyundou.net   日期:2024-09-25

本实验室应用的Folin-酚试剂为北京某某昌盛生物技术有限公司生产,效果尚可,该公司生产的BCA蛋白定量试剂盒比Folin-酚试剂检测更精确,且不受绝大部分样品中的化学物质的影响,对于蛋白纯化样本含量测定来说更加适合。

1、Folin-酚法(Lowry法)原理:

  这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原,产生深蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物)。在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比。

2、技术指标:

  本试剂盒可测定蛋白浓度0.05--1mg/ml。当蛋白浓度范围在0.05-0.5mg/ml范围时,线性关系最好。标准曲线相关系数:R2大于0.99.

3、试剂盒组分:

  1.Folin—酚试剂甲

溶液I:2g无水碳酸钠和20mg酒石酸钠溶于100ml 0.2mol/l氢氧化钠中(已配制成5×,用时稀释5倍,使用完需另配)。

溶液Ⅱ:0.5g五水硫酸铜溶于100ml水溶液。

将稀释后的溶液I与溶液Ⅱ,以50:1的比例混合,混合后即为Folin—酚试剂甲,此试剂只能用一天,过期失效。

  2.Folin—酚试剂乙

原液浓度为2moL/L使用前需稀释一倍,用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L。此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。

4、操作方法:

  标准曲线的制作

  取14支试管分成两组,按下表顺序加入试剂,混匀,于室温放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙,立即摇匀,在室温放置30分钟,然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值,以蛋白质浓度为横座标,光密度值为纵座标,绘制标准曲线为定量的依据。

试剂/管号

0

1

2

3

4

5

6

BSA/ml(250ug/ml

0

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

蒸馏水/ml

1.0

0.9

0.8

0.6

0.4

0.2

0

试剂甲/ml

5

5

5

5

5

5

5

试剂乙/ml

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

样品测定:

(1)取1毫升样品溶液(约含20-250微克多肽或蛋白质)加入5毫升试剂甲混匀,于室温放置10分钟。

(2)加入0.5毫升试剂乙(folin—酚),立即摇匀,于室温保温30分钟;然后500nm(根据使用情况)处比色,以1毫升水代替样品作空白对照。测定后,可以从标准曲线中查出未知样品浓度。

  若用0.5厘米光程的比色杯进行比色,可按下面方法进行操作:取0.2毫升样品溶液(约含5-100微克多肽或蛋白质),加入1毫升试剂甲(可选用0.3-0.5厘米直径的小试管)混匀,10分钟以后,再加入0.1毫升试剂乙,立即混匀,30分钟后比色,一般来说,若多肽或蛋白质浓度在2-25微克,则采用波长755nm,而25微克以上则采用500nm比色为宜(波长选择依使用情况)。









样本1

样本2

样本3

试剂/管号

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

BSA/ml(250ug/ml)或样本

0

0.02

0.04

0.08

0.12

0.16

0.2

0.2

0.2

0.2

蒸馏水/ml

0.2

0.18

0.16

0.12

0.08

0.04

0

0

0

0

试剂甲/ml

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

试剂乙/ml

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

测值1











测值2











计算Pr=











紫外分光光度计测Pr=











500nm波长


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宿乐版698什么叫福林试剂?福林试剂有什么作用? -
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樊司闵18789725740 ______ 是危险品 铁路上对这类东西没有相应的限制.

(编辑:自媒体)
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