folin酚试剂
本实验室应用的Folin-酚试剂为北京某某昌盛生物技术有限公司生产，效果尚可，该公司生产的BCA蛋白定量试剂盒比Folin-酚试剂检测更精确，且不受绝大部分样品中的化学物质的影响，对于蛋白纯化样本含量测定来说更加适合。
1、Folin-酚法（Lowry法）原理：
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
2、技术指标：
本试剂盒可测定蛋白浓度0.05--1mg/ml。当蛋白浓度范围在0.05-0.5mg/ml范围时，线性关系最好。标准曲线相关系数：R2大于0.99.
3、试剂盒组分：
1.Folin—酚试剂甲
溶液I：2g无水碳酸钠和20mg酒石酸钠溶于100ml 0.2mol/l氢氧化钠中（已配制成5×，用时稀释5倍，使用完需另配)。
溶液Ⅱ：0.5g五水硫酸铜溶于100ml水溶液。
将稀释后的溶液I与溶液Ⅱ，以50：1的比例混合，混合后即为Folin—酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。
2.Folin—酚试剂乙
原液浓度为2moL/L使用前需稀释一倍，用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L。此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。
4、操作方法：
标准曲线的制作
取14支试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室温放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线为定量的依据。
试剂/管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
BSA/ml(250ug/ml | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸馏水/ml | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
试剂甲/ml | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
试剂乙/ml | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
样品测定：
（1）取1毫升样品溶液（约含20-250微克多肽或蛋白质）加入5毫升试剂甲混匀，于室温放置10分钟。
（2）加入0.5毫升试剂乙（folin—酚），立即摇匀，于室温保温30分钟；然后500nm（根据使用情况）处比色，以1毫升水代替样品作空白对照。测定后，可以从标准曲线中查出未知样品浓度。
若用0.5厘米光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2毫升样品溶液（约含5-100微克多肽或蛋白质），加入1毫升试剂甲（可选用0.3-0.5厘米直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1毫升试剂乙，立即混匀，30分钟后比色，一般来说，若多肽或蛋白质浓度在2-25微克，则采用波长755nm,而25微克以上则采用500nm比色为宜（波长选择依使用情况）。
样本1 | 样本2 | 样本3 | ||||||||
试剂/管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
BSA/ml(250ug/ml)或样本 | 0 | 0.02 | 0.04 | 0.08 | 0.12 | 0.16 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
蒸馏水/ml | 0.2 | 0.18 | 0.16 | 0.12 | 0.08 | 0.04 | 0 | 0 | 0 | 0 |
试剂甲/ml | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
试剂乙/ml | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
测值1 | ||||||||||
测值2 | ||||||||||
计算Pr= | ||||||||||
紫外分光光度计测Pr= |
500nm波长
水朗霭979福林酚试剂测蛋白含量的详细原理是什么? -
祁详陈13081359764 ______ 福林试剂里面有钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、硫酸锂、溴水. 对比蛋白测定与蛋白酶活力测定用福林酚试剂配制方法(国标),发现两者的区别为硫酸锂的添加量前者为150g后者为50g,只知道福林酚试剂能够被酪氨酸等的酚基还原,产生钨蓝和钼蓝,详细原理不清楚. 所以不知道硫酸锂的作用,也就不知道在购买福林酚试剂(测蛋白酶)时,有没有必要非得特意的买用于测蛋白酶活力的,百度一下,只有一家公司标出了用于蛋白酶活力测定. 特别是硫酸锂的作用.
水朗霭979folin 酚法测蛋白质含量为什么要求加入乙试剂后立即混匀 -
祁详陈13081359764 ______ 第一步相当于双缩脲反应,在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物;第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物 (呈蓝色反应),因此需要快速混匀 继续实验
水朗霭979folin - 酚试剂法测定蛋白质含量 -
祁详陈13081359764 ______ 讨论主要目的就是验证实验原理的可行性和实验目的的正确性. 主要就是写下Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用.此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同等这个原理
水朗霭979酚试剂法测定蛋白质浓度有何优缺点 -
祁详陈13081359764 ______ 优点:灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多. 缺点:费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰folin-酚反应(Lowry反应).而且对后者的影响...
水朗霭979有什么因素可干扰folin 酚 -
祁详陈13081359764 ______ 1.干扰物质 此法是在Folin-酚法的基础上引入双缩脲试剂,因此凡干扰双缩脲反应的基团,如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2以及在性质上是氨基酸或肽的缓冲剂,如Tris缓冲剂以及蔗糖,硫酸铵,巯基化合物均可干扰Folin-酚反应.此外,所测的...
水朗霭979Folin - Ciocalteus是什么意思 -
祁详陈13081359764 ______ Folin-Ciocalteus是福林酚,是一种化学试剂,它由多种化合物配制的混合物.
水朗霭979酚顿试剂配制方法 -
祁详陈13081359764 ______ 配制方法:试剂甲:A液:Na2CO3 10.00g NaOH 2.00g 酒石酸钾钠(或钾盐钠盐) 0.25g 混合、溶于500ml蒸馏水中.B液:CuSO4·5H2O 0.5g H2O 100.00ml 用前将A液50份与B液1份混合即为试剂甲.试剂乙:于磨口回流瓶加入下列试剂 ...
水朗霭979lowry法是什么? -
祁详陈13081359764 ______[答案] 就是Folin---酚法测定蛋白质含量 原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应.蛋白质中含有代酚基的酪氨酸,故有此反应.Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍. 试剂:一:1,4%碳酸钠;2,0.2N氢氧化钠;3,1%硫酸铜...
水朗霭979为什么folin酚法只适合测定浓度低的蛋白质 -
祁详陈13081359764 ______ ①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量. ②双缩...
水朗霭979能与FOLIN酚反应的物质有? -
祁详陈13081359764 ______ 答案是Tyr 酪氨酸 Trp 色氨酸是乙醛酸反应