mirna检测
伍诞星1202求助,加尾法检测miRNA引物如何设计 -
尤昆疯17831552470 ______ miRNA引物设计(茎环法+染料法检测) 设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上. 反转录茎环通用序列: ...
伍诞星1202miRNA芯片是什么 -
尤昆疯17831552470 ______ 用来检测miRNA表达谱的一种生物芯片 将寡合苷酸先固定在芯片介质上,再通过杂交方式 与样品中的miRNA结合 以鉴定miRNA的表达与否,及表达高低
伍诞星1202如何逆向通过基因找与他作用的mirna -
尤昆疯17831552470 ______ 免疫沉淀当然,确定miRNA与mRNA之间的互作,我们还有更直接的方法,那就是从实验上寻找物理相互作用.我们可以利用RNA诱导沉默复合物(RISC)中的Argonaut(AGO)蛋白的抗体进行免疫共沉淀(co-IP).生物通目前更先进的方法是通过...
伍诞星1202如何找出参与特定疾病的基因和microrna -
尤昆疯17831552470 ______ 目前常见的miRNA检测方法包括 Northern Blot、微阵列芯片、微球、实时荧光定量PCR等技术,然而由于以下原因而各具缺陷.首先,由于miRNA本身碱基数过少,使得探针碱基序列的选择受限.并且不同microRNA 具有不同的最适杂交温度,...
伍诞星1202各位前辈,新手求教,我要做血浆中的miRNA差异表达的验证,需要什么试剂,牌子,大概价位有多少? -
尤昆疯17831552470 ______ exiqon的miRCury系列与Life technologies的miRVana系列都是业内最有竞争力的产品.这两个公司都各自有抽提miRNA的试剂盒、逆转录试剂盒、引物设计、实时荧光定量PCR 的全套产品.设计原理稍微有所不同.个人印象Exiqon在血浆的miR抽提方面比较有经验,而Life Tech在定量PCR方面的Tagman技术比较老牌知名.我实际经验只有使用过Life Tech的miR 反转录与PCR试剂盒.每150个反应的引物与探针就要花1500元左右,这还不包括PCR与反转录反应体系的酶与其他试剂.
伍诞星1202如何筛选目的基因的miRNA -
尤昆疯17831552470 ______ 你指的是寻找miRNA的靶基因位点吗? 一般都是利用生物信息学软件进行预测,但这种预测都是有局限性的,比如miRNA可能会与靶基因之间产生错配,这样会丢失一些靶基因,另外预测的都未经过实验的验证,还需要进行实验的验证来去伪存真. 当然植物可以使用降解组测序的方法来进行靶基因预测,原理就是植物中miRNA与mRNA往往是碱基近乎完全匹配来结合后将mRNA降解,剪切位点通常位于miRNA的第十位或第十一位碱基,被剪切后的片段可以通过建库后进行测序,可以真实的得到miRNA在mRNA上的作用位点的序列. 动物的就不行了,动物中一般是miRNA结合在mRNA上对mRNA翻译进行抑制,无法像植物那样得到其降解后的小片段进行测序验证
伍诞星1202如何预测和鉴定miRNA的靶基因 -
尤昆疯17831552470 ______ 现在有一些预测miRNA靶基因的算法和网站,免费的,例如miRtarget等,网上一搜一大把.可以用它们去预测. 但这些算法常常不是很靠谱,因此应多几种算法综合考虑.但这样仍然不是特别靠谱. 实验筛查的方法目前最有效的是转录组+翻...
伍诞星1202查miRNA的靶基因需要miRNA的序列吗 -
尤昆疯17831552470 ______ 要知道miRNA的靶基因,肯定要知道你要查哪个miRNA的靶基因,知道是哪个miRNA,去miRBase上就能知道序列信息了,很容易获取.生物信息学预测的话,分植物、动物两种情况,植物是miRNA与靶基因完全匹配,处于mRNA翻译区,动物是2~9位种子序列部分匹配,处于mRNA的3'UTR区域.
伍诞星1202如何利用NCBI查找miRNA前体所在的基因DNA序列 -
尤昆疯17831552470 ______[答案] 在NCBI主页输入要查找的miRNA的名称,all database中选择GENE;在搜索结果中选择目的miRNA,在NCBI reference sequences(RefSeq)栏中点击目的miRNA的ID号即转到序列,还可以通过链接到UCSC、miRBase查找
伍诞星1202什么是miRNA? -
尤昆疯17831552470 ______ MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸).MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达.因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用.