pcr二次扩增
“红管管，白签签，大家一起做核酸。”在群众眼中，核酸检测很简单，只有两步：扫码采样和查询报告。但事实上，这在常人眼中看似简单的两步背后，却凝聚着核酸检测人员不为人知的辛苦付出。今天，我们就来一起探访宁津县人民医院检验科PCR实验室，带大家了解核酸检测人员的工作。
核酸检测人员是抗疫战中的排雷兵，每天与新冠病毒正面 “交锋”。进入实验室之前，他们必须全身“武装”，N95口罩、防护服、护目镜、防护面屏、双层手套、防水靴套等用品的穿戴必须执行严格要求，容不得一丝马虎。
“实验室里检验人员每天要不断重复着样本核对签收、样本灭活、手工加样、核酸提取、上机扩增、结果分析、出具结果报告等多个步骤，整个过程环环相扣，都只能纯手工操作，一个动作甚至需要重复上千次。”宁津县人民医院检验科检验技师武雅茹说。
只要进入实验室，检验人员不喝水、不进食、不如厕，一直坚持到检验完成。加上防护服密不透风，工作时间又长，每轮实验下来，都是对检验师体力和意志力的双重考验。
在PCR实验室，这个被称为“距离病毒最近的地方”，一份份核酸检测结果从这里出来。这里有一群抗疫“幕后无名英雄”，核酸检测实验室是他们的战场，他们默默地坚守着自己的岗位，履行着自己的职责和使命。
宁津县人民医院检验科主任陈春杰说：“我们检验科下设6个分组，包括分子组（PCR实验室）、临检组、生化组、免疫组、微生物组、艾滋病筛查组，总共有26名工作人员，其中PCR实验室6人，分为两班，白班和夜班，每个班次12个小时，这次核酸检测我们负责检测部分乡镇送来的核酸样本以及本院的医务人员和患者、陪人样本，愿检尽检样本，院外环境、重点场所环境样本，承接德城区样本，最高的时候一次接收达到4000多管。标本量多的时候，检验科全体人员24小时在岗在位，随时调整工作班次，科室还抽调了5人外出支援，所以很多时候都是其他小组做完日常检测工作后紧接着就去PCR实验室，中间只有30分钟吃饭时间。但我们不是在孤单奋斗，在医院和输血科、病理科等兄弟科室的大力支持下，我们确保了核酸结果及时准确地发出。8月28日以来，共检测核酸样本8000多管，共计17万人次。”
在宁津县人民医院核酸检测实验室，有三个功能分区，一区负责试剂的准备和实验耗材，二区负责接收标本、拆包、排板、编号、加样、扫码等，三区是扩增分析区。核酸检测的每一步都需要人工操作。从开箱拿出采样管，到核酸提取、体系配置、扩增检测、结果分析等，每个看起来有条不紊的操作程序背后，都充满了高度风险。检验师杨璐瑶与同事们穿着白色防护服，和病毒面对面、“零距离”接触，小心翼翼，全力筑牢生命安全防护线。
杨璐瑶：“穿上防护服的那一刻，就会有一份责任，就是这份责任让我们认真对待每一份标本，将标本精准高效地检测出来。”
一份“阴性”的核酸检测报告，是老百姓心中的一颗定心丸，更是宁津县打赢疫情防控的最大动力。一份份样本、一组组数据，筑起一道道病毒“防火墙”，宁津县人民医院马力全开单日最高检验核酸数可达6.4万人，用无畏姿态诠释了宁医人的担当！ （陈伟伟）
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竺睿梵3064巢式pcr是什么意思?
夏薛馨18351572654 ______ 巢式PCR(nested PCR),是指利用两套PCR引物(巢式引物)对进行两轮PCR扩增反应.在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增.河南省公安医院肝病治疗中心肝病专家解释说,由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性.一般应用于动物方面.如:病毒,梅毒螺旋体,HIV,肿瘤基因等.
竺睿梵3064PCR产物条带浅怎么办 -
夏薛馨18351572654 ______ 1、如果引物是特异性的引物,只有单一的一条带,切胶连接转化,转化的时候取得dna多一点; 2、如果是多条带,而你的目标条带不亮,而其他的很亮,换引物; 3、新引物可以多设几个梯度(4~5个),如果没有,且底部有大量的二聚体,再换引物吧.... 至于上面说的用PCR产物再扩一次,我个人认为不是很合适除非你只是要一个很亮的条带,二次扩增的结果很可能是杂乱无章的
竺睿梵3064利用pcr技术扩增目的基因,为什么是三次 -
夏薛馨18351572654 ______ PCR扩增就是循环步骤,一般进行20-40个循环.每次循环*2(不考虑扩增效率). 你说的三次是什么意思? 最多这样(自己看图理解): 至此,就是三个循环,卡住了一个大小区间(比如100bp),接下来 以此不断重复.
竺睿梵3064为什么PCR技术 在第三轮循环产物中 才开始出现两种引物之间的序列 循环产物的轮数就是扩增循环的次 -
夏薛馨18351572654 ______ 因为第一轮循环以加入的基因组等为模板,上下游引物分别结合反义链和正义链,扩增获得长度不等的pcr产物,然后第二轮以第一轮的产物为模板,扩增获得较短(与第一轮的产物比较)且长度不等的pcr产物,此时的pcr产物只受到上游或下游单条引物的限制,所以长度不等,第三轮扩增以第二轮的产物为模板,同时受到上下游引物的限制,获得两条引物间的序列.
竺睿梵3064pcr扩增8000bp怎么办? -
夏薛馨18351572654 ______ 可以尝试Roche的长片断扩增pfu酶,当然可能会稍微贵点.一般的酶可能扩不了这么长.我还有个方法就是,你的目的片断中找一个单酶切的位点把目的片断分为两段扩增,再分两次连到载体中,这样会好扩增得.
竺睿梵3064什么是PCR扩增技术 -
夏薛馨18351572654 ______[答案] 基因扩增技术(PCR)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新.可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分...
竺睿梵3064请问谁能具体解释一下巢式PCR法? -
夏薛馨18351572654 ______[答案] 就是多重PCR,第一次获得产物浓度不够,但循环数过多会造成产物质量不好,就会以第一次PCR产物为模板,设计内引物进行第二次扩增,获得高质量产物
竺睿梵3064我想问什么是反转录PCR? -
夏薛馨18351572654 ______ 反转录PCR就是把RNA提取后反转录成cDNA,并以其为模板进行的PCR反应,通常用于检测某种RNA是否被表达,或者比较其相对表达水平 巢式PCR(nested PCR),是指利用两套PCR引物(巢式引物)对进行两轮PCR扩增反应.在第一轮扩增...