pmd19t+vector

羊询元1794单酶切连接的问题? -
蓝叙油15097523944 ______ 1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.

羊询元1794TAKARA的PMD18 - T载体可以用哪个通用引物验证? -
蓝叙油15097523944 ______ 用这两种引物:BcaBEST Sequencing Primer M13-47和BcaBEST Sequencing Primer RV-M Vector size (bp) 2692 Cloning Site 425 LacZ α-peptide 146-475 Ampicillin resistance gene 1632~2492 pUC origin 873-1461 primer binding sites: BcaBEST Sequencing Primer M13-47 binding site 352-375 BcaBEST Sequencing Primer RV-M binding site 484-507

羊询元1794pmd19有Notl酶切位点吗? -
蓝叙油15097523944 ______ 是Takara的19-T吗?它说明书上没有显示有这个酶切位点 但是你再确认下,方法:下载pmd19的序列,NotI酶切的序列是GCGGCCGC,查找看pmd19序列里是否有GCGGCCGC即可

羊询元1794pmd18 - t如何与指定DNA结合 -
蓝叙油15097523944 ______ 不能结合.重新设计PCR引物,在两端加入限制性酶切位点,或者pmd 18-t MSC上任意酶切位点的3'和5'同源DNA,以你现在的DNA产物为模板重新进行PCR扩增后,利用Ligation或者In-fusion将你的DNA片段插入载体.

羊询元1794pmd18 - t载体,在琼脂糖电泳中的位置
蓝叙油15097523944 ______ 1、购买的pMD18-T载体(如Takara的)本身就是线性的(因为已经经过EcoRV酶切了).相当于2962bp线性DNA片段. 2、质粒电泳请用Supercoiled DNA Ladder Marker. 3、还是那句话,市售的pMD18-T载体你电泳的话只有一条条带.

羊询元1794PMD18 - T能够进入细胞核吗 -
蓝叙油15097523944 ______ PMD18-T以大肠杆菌为宿主菌的,大肠杆菌是原核生物,哪来的细胞核?另外,PMD18-T是T载体,在细胞中是以质粒的形态存在于细胞中的,而不会整合到基因组中.事实上,对于原核生物的载体,没有明确说明的情况下,都是以质粒形式存在的.

羊询元1794我用的PMD18怎么与目的片段连不上呢?你的转到菌里了吗? -
蓝叙油15097523944 ______ pMD18-T的连接效果还是不错的,请确定你是严格按照使用说明进行操作的.注意插入片段的大小,不是什么东西都能插的.不行就换pMD19-T,19比18更好用.

羊询元1794在使用pMD18之类的T载体时,怎样加A,加A是必要的吗 -
蓝叙油15097523944 ______ 博凌科为-为你解答:PCR中的taq酶一般是直接加A的,也就是你PCR做完只要割胶纯化就可以直接连了,不用额外想着加A什么的.但是要注意的是PCR反应后不能放置太久,一般当天就做T-A克隆,最好不要超过2、3天,越早做越好,因为即便放在-20也是会掉A,这样肯定就很难做T-A克隆了,有人隔了5天左右再做就发现已经很难转化到了,甚至是没有长.

羊询元1794双酶切鉴定(或者测序)是否含有目的基因的时候,为何用pMD18 - T载体? -
蓝叙油15097523944 ______ 通常先分析一下目的基因上存在哪些常见的酶切位点, 再选择合适的克隆载体.保证你双酶切的位点在目的基因上不会出现. PMD18-T克隆位点两侧的酶切位点比较多,很常用的.

羊询元1794GelRed染色是否会对后续的TA克隆、测序、酶切产生影响? -
蓝叙油15097523944 ______ 不会. 我们实验室就是用GelRed染色,对后续试验没有产生过影响. 切胶回收后,理论上是没有GelRed了,不会对后续试验产生影响.