qpcr三步法与两步法

荆真狡2502什么是q - RT - PCR技术 -
班风庆14723625331 ______ 【q-RT-PCR技术】就是结合了荧光定量技术的反转录PCR(反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程,是DNA生物合成的一种特殊方式):先从RNA反转录得到cDNA(RT),然后用Real-time PCR进行定量分析(qPCR). 【...

荆真狡2502理论的引物退火温度与我设想的怎么不一样 -
班风庆14723625331 ______ 1.按照公式计算,那公式只是个经验公式,不绝对准的.2.引物的真实退火温度跟溶液体系中的离子强度、pH等都有关,所以不是一个绝对不变的值.公司的退火温度应该是根据他在合成过程中的体系条件给出的.3.真正的适用温度还需要你在实验中优化确定.前2者只是参考.

荆真狡2502关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR -
班风庆14723625331 ______ 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数

荆真狡2502qPCR和real - time qPCR什么区别 -
班风庆14723625331 ______ 这个是分子工程里的术语,怎么拿到计算机硬件区里来了呢? QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System.即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR. real time pcr 实时定量PCR www.0bio.com

荆真狡2502qpcr之sybr green染色法和taqman探针法的异同 -
班风庆14723625331 ______ taqman是探针法 SYBR Green是染色法 一般来说SYBR Green没有Taqman的特异性好,因为没有特异性的探针,但如果SYBR Green的结果是特异的(可以通过溶解曲线来验证)就没有问题. 反而有时候SYBR Green的扩增曲线要漂亮些.

荆真狡2502如何用qpcr检测细胞是否可以产生某蛋白质 -
班风庆14723625331 ______ 如果避免了预扩增,数据可转换成绝对的cDNA数量,否则数据分析可以Cq值来开展,因为每个细胞的转录本水平呈对数正态分布.一开始,可以各种方法对数据作图,此外,基本的统计分析也应开展(如阳性细胞的数量、平均值和偏差).细...

荆真狡2502一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 -
班风庆14723625331 ______ 一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2*的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以.由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于...

荆真狡2502定量pcr的扩增曲线怎么是这样的 -
班风庆14723625331 ______ 可能是模板浓度太低了,都没有达到阈值的,刚开始要做不同浓度梯度的,摸一下模板浓度条件

荆真狡2502不同时间点测qpcr,结果相反怎么解释 -
班风庆14723625331 ______ 同样的体系和反应程序的话,你肯定至少有一个做错了.qPCR相对于普通PCR再大的优点就是灵敏度高,可重复性极好

荆真狡2502实时荧光定量PCR的具体步骤和注意事项是什么呢? -
班风庆14723625331 ______ 加样放到qPCR仪里P得到结果整理数据注意:加样时尽量减小误差,引物探针设计要好