qpcr绝对定量法

王邵罗2862土壤微生物量测定有没有分子方法 -
沙怜扶19814999998 ______ 最准确的测定方法是用Real-time qPCR.提取土壤中微生物的总DNA,然后以16S rRNA作为目标序列,设计引物进行绝对定量.目的片段一般在200-300bp比较合适,所以引物可以采用V3或其它可变区的两端.标准品就用已知浓度梯度的大肠杆菌就行,它的浓度可以用Nano-Drop测得.

王邵罗2862做QPCR需要跑电泳吗 -
沙怜扶19814999998 ______ 所以,我认为,要想出一个靠谱的实验,也为了避免实验结果显示的乱七八糟,还是做一下比较好.还有一种电泳则是cDNA电泳,那是半定量必须要做的一步,但对于QPCR来说,做了无非是锦上添花,不做也无可厚非.甚至有时候就是浪费时间而已....

王邵罗2862关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR -
沙怜扶19814999998 ______ 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数

王邵罗2862Real - time PCR和RT PCR有什么区别 -
沙怜扶19814999998 ______ RT-PCR现在一般指反转录PCR,有时候也被说成Real-time-PCR就是实时定量PCR; Real-time-PCR就是实时荧光定量PCR,现在标准的说法是qPCR,就是定量PCR.

王邵罗2862小分子RNA的检测方法 -
沙怜扶19814999998 ______ 实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术.该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,...

王邵罗2862数字PCR检测方法如何选择? -
沙怜扶19814999998 ______ 数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术.相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量. 在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你...

王邵罗2862抗除草剂转基因植株如何确定单拷贝? -
沙怜扶19814999998 ______ qPCR,与标准品进行比较,进行绝对定量,然后就可以计算出在基因组中的拷贝数.

王邵罗2862数字PCR的原理? -
沙怜扶19814999998 ______ 数字 PCR 的工作原理在于将 DNA 或 cDNA 样品分割为许多单独、平行的 PCR 反应,部分这些反应包含了靶标分子(阳性),而其他不包含(阴性). 单个分子可以被扩增一百万倍或更多. 在扩增期间,TaqMan® 化学试剂及染料标记探针...

王邵罗2862Crystal数字PCR如何实现的核酸绝对定量? -
沙怜扶19814999998 ______ 数字PCR是一种核酸分子绝对定量技术.是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合.相较于qPCR,BIOG数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量.

王邵罗2862绝对定量pcr怎么确定菌群数量 -
沙怜扶19814999998 ______ 目标序列选择细菌基因组中单一拷贝数目的特异序列.菌群测得总体积,取一定量的小体积细菌提取DNA.再在提到的已知体积的DNA溶液中取一定体积的样本做定量PCR.这样可以得到DNA拷贝数.用来菌群的总体积,DNA的总体积都是已知的,把得到的数值分别乘以体积的反比例,就可以得到最终的数量了.