qpcr相对定量计算方法

巴奖史2627相对定量PCR中的标准差从哪里来 -
席疮枯18933041853 ______ 单独做几次试验(不是同一个样本PCR,而是不同的实验),得到值后算出来的.每次都设对照组为1.

巴奖史2627荧光定量PCR实验相对定量法中的RQ代表什么意义 -
席疮枯18933041853 ______ RQ:relative quantity,相对表达量 RQ min和RQ max是置信区间,计算有点复杂,一般用不到,做图一般用均值加标准差.如需设计引物,可以添加为青生物公众号,由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务.

巴奖史2627请问做实时荧光定量PCR实验时,为什么做标准曲线? -
席疮枯18933041853 ______ 1 做标曲才可以算出这对引物的扩增效率(其斜率),方便用pfaffl方法来进行相对定量(得到的结果相对精确一点),否则只能默认扩增效率为2,用2^-ddCt(Livak)法来计算 2 做标曲才可以绝对定量.

巴奖史2627实时荧光定量PCR(qPCR)实现了PCR从定性到定量的飞跃.Taq Man探针是qPCR技术中一种常用探针(如图1),其y末端连接荧光基团(R),3'末端连接淬... -
席疮枯18933041853 ______[答案] (1)分析图解,Taq Man探针中含有碱基U,说明该探针为单链RNA,而质粒为小型环状DNA,因此与质粒相比,Taq Man探针中除荧光基团、淬灭剂外,特有的化学成分是核糖和尿嘧啶.(2)PCR技术的原理是DNA的双...

巴奖史2627如何检测定量引物的扩增效率 -
席疮枯18933041853 ______ 构建质粒标准品或者PCR产物标准品,做标准曲线,计算扩增效率

巴奖史2627关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR -
席疮枯18933041853 ______ 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数

巴奖史2627数字PCR检测方法如何选择? -
席疮枯18933041853 ______ 数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术.相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量. 在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你...

巴奖史2627我想问一下荧光定量PCR法用2 - △△Ct计算相对定量的问题 -
席疮枯18933041853 ______ 你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数(相对量).实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以上的数值就可以算均数和标准差了.

巴奖史2627基因表达相对定量PCR 的数据处理 -
席疮枯18933041853 ______ 貌似没有一个统一的标准 我们习惯是先计算管家基因的平均Ct值 然后拿每一个目的基因的平行样去减这个平均值 然后再2的次方啥的 算出来的值做平均和标准差作为该组的结果

巴奖史2627一次荧光定量pcr反应能检测多少个突变位点 -
席疮枯18933041853 ______ 这个看你自己的设置.qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道.理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照.那么可以做94*4=376个.当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等.具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个试剂盒可以同时检测54种突变.