rna浓度太低怎么逆转录
桂苏话2290RNA在什么情况下发生逆转录? -
凌廖徐13619431890 ______ 细胞生物正常情况下不会发生RNA逆转录或是复制RNA复制是以RNA为模板 以核糖核苷酸为原料合成的逆转录酶”的作用下,能够发生以RNA为模板,合成DNA,这是对“遗传中心法则”的一个重要补...
桂苏话2290DNA怎么逆转录.举几个例子 -
凌廖徐13619431890 ______ 到目前为止,没听过DNA逆转录,我们只学过RNA逆转录.Temin等人发现,某些引起肿瘤的RNA病毒以RNA为模板,反向地合成DNA(即反转录,也称逆转录),然后再以这段病毒为模板,互补地合成RNA,这是病毒复制的另一种方式. 希望能够对你有所帮助.
桂苏话2290如何从冻存的细胞提取RNA十万火 -
凌廖徐13619431890 ______ 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
桂苏话2290rna病毒那些能逆转录? -
凌廖徐13619431890 ______ 不一定 例如呼肠孤病毒(reovirus)是双链RNA病毒,侵染之后通过不对称的转录复制出正链RNA翻译,再形成双链RNA,不经过DNA! 像HIV病毒和劳斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)是典型的逆转录病毒,其感染经过前病毒(双链DNA形式)阶段,其基因组有逆转录酶基因,关键的是病毒基因组两端有LTR(Long Term Repeat)长重复序列,与逆转录过程正常进行有关.具体反应比较复杂,有10步,2个“跳跃”,可以看《生物化学》关于遗传物质的章节,上面有详细介绍.
桂苏话2290逆转录PCR的介绍 -
凌廖徐13619431890 ______ 逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
桂苏话2290反向PCR怎么做 -
凌廖徐13619431890 ______ 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
桂苏话2290RNA逆转录需要DNA聚合酶吗 -
凌廖徐13619431890 ______ 需要的 RNA逆转录合成的是DNA ,而由于DNA是双链 ,所以需要RNA作为模版 ,DNA聚合酶来把游离的脱氧核苷酸连接到上面
桂苏话2290细菌RNA反转录 -
凌廖徐13619431890 ______ 反转录试剂盒中都有一个random primers,它是6碱基随机引物的混合物.
桂苏话2290如何用RT - qPCR检测RNA浓度 -
凌廖徐13619431890 ______ 提RNA你会吧... 反转录你会吧...如果只是检测一般的mRNA的表达量 就用poly T反转录就可以了 如果是特殊的必须去另外合成特异引物 如果你想得到确切的浓度值 那必须在做RT的时候检测一个标准品 就是这里面东西的浓度你是确切知道的 然后做一条标准品曲线 然后拿你要检测的那个得到的值带到那个曲线里面就算出浓度了 大部分时候都是检测相对含量 就是这个mRNA在不同东西里面的比较 那就不用做标准品曲线 直接把得到的几个值比较下关系就可以了 大部分检测用的内参都是GAPDH 其他还有U6 U7可选
桂苏话2290请教如何从培养细胞提取mRNA -
凌廖徐13619431890 ______ 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.