shrna质粒载体构建

鲍姣冠5022shRNA和miRNA有什么区别? -
上傅力19554336855 ______ shRNA干扰载体构建:短发卡RNA (shRNA) 是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA (siRNA, 19-21个核苷酸的RNA 双链)的DNA分子.我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆到特定载体上.

鲍姣冠5022构建RNAi载体用的I型启动子和其他启动子有什么区别?用II型不行么?
上傅力19554336855 ______ 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段45—50nt的发夹结构RNA(small hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA,从而引发基因沉默或者表达抑制.这一类启...

鲍姣冠5022真核质粒转染与脂质体转染有什么不同? -
上傅力19554336855 ______ 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA. 两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周). 另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.

鲍姣冠5022质粒的构建过程 -
上傅力19554336855 ______ 因为高拷贝质粒稳定性低,而且给宿主细胞的压力大. 低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1~2次,而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10~200拷贝. 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid),独立于细菌细胞而自...

鲍姣冠5022构建质粒载体中主要做了哪些工作? -
上傅力19554336855 ______ 载体分为:克隆、表达、整合载体.你指的哪种? 你要构建载体还是前人做了哪些工作?你的把问题说清楚:)

鲍姣冠5022结合PBR322质粒载体构建过程,总结质粒载体的特点和质粒载体构建的原则? -
上傅力19554336855 ______[答案] 基因载体的条件;一、能自主复制或随受体细胞染色体DNA一起复制.二、易于鉴定和筛选.三、限制酶对其作用的切割点少.四、易与引入受体细胞. 质粒 是细菌染色体外的小型环状双链DNA,质粒可以自我复制,而且质粒上有多个限制性内切酶的酶...

鲍姣冠5022克隆和质粒构建是做什么的 -
上傅力19554336855 ______ 质粒是现代分子生物学中常用的载体之一, 质粒构建,就是指把特定的基因序列插入到工程质粒中. 但仅仅插入质粒是不够的,还需要把质粒转化到细菌、细胞或酵母中,使质粒在其中扩展或表达.以细菌为例,转化后的细菌还需涂布到平板,使之分散为单个细菌,在合适的条件下培养,单个细菌长成菌落,这时,这个菌落的所有的菌都是有一个细菌分裂而来,其状态和携带的质粒是一致的,就俗称一个“克隆”,用于后续实验. 从无性繁殖的角度来讲,上述的“克隆”和克隆羊的“克隆”概念是一致的.

鲍姣冠5022目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图所示.(1)构建人... -
上傅力19554336855 ______[答案] (1)质粒上的抗性基因可作标记基因,便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.(2)在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点,即目的基因两侧有-GAATTC-,目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端为.(3)DNA连...

鲍姣冠5022目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图一所示.(... -
上傅力19554336855 ______[答案] (1)质粒上的抗性基因可作标记基因,便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.(2)在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点,即目的基因两侧有-GAATTC-,且EcoRⅠ的切割位点在G和A之间,因此目的基因两侧被限制酶EcoRI切...

鲍姣冠5022基因表达载体和重组质粒的区别 -
上傅力19554336855 ______ 基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心. 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程.如果以质粒作为运载体, 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质...