trizol提取蛋白

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

勾邓栋3059怎样从小鼠肺组织中提取总蛋白?第一次做,也没人教,希望步骤越详细越好!蛋白提取液和裂解液一样吗? -
厉寿品15050937811 ______ 你好,提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分...

勾邓栋3059DNA和RNA提取原理是什么?还有相关试剂盒的原理,各步的作用~ -
厉寿品15050937811 ______[答案] TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的...

勾邓栋3059我提的RNA怎么这样???RNA污染了蛋白怎么办?
厉寿品15050937811 ______ 提组织的RNA有的时候蛋白的含量会很多,可以在加TRizol和氯仿抽提完第一次以后不加异丙醇,而直接加入TRizol氯仿再抽提一次,第二次抽提后会发现中间的蛋白明显减少的,如果感觉蛋白还是很多的话,再抽提一次也是可以的.另外抽提后,吸取上层相的时候千万不要贪多,至少最后一次抽提后,一定要确保只吸上层相. 但如果RNA的量比较大的也有可能在加入异丙醇后看见沉淀,当然不会是很多沉淀,如果确保多次正确操作抽提后仍可见沉淀,也许是RNA的量比较大,建议继续提完,再看看效果.

勾邓栋3059如何分离DNA -
厉寿品15050937811 ______ 盐析法:DAN与蛋白质结合形成的核蛋白溶于高盐溶液,但不溶于低盐溶液;而RNA形成的核蛋白易溶于低盐溶液,因此可用高盐溶液从细胞破碎液中提取DNA核蛋白,还可以除去RNA..

勾邓栋3059请问Trizol试剂提取RNA相关问题,请问下为什么在Trizol试剂提取RNA时,加入氯仿离心后RNA在上层水相,DNA在中间层,蛋白质在下层有机相,但用... -
厉寿品15050937811 ______[答案] 我记得是pH值的关系 不过也没那么严格,实际上提取RNA后如果可能,还是需要一步加入DNase消化的过程

勾邓栋3059trizol法提取RNA分成的三相分别是什么 -
厉寿品15050937811 ______[答案] 上层无色,接近透明色的为RNA;中层白色(很薄)的为DNA;下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.

勾邓栋3059怎么提取RNA? -
厉寿品15050937811 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

勾邓栋3059无RNA酶和DNA酶活性TRIzol是什么呢?
厉寿品15050937811 ______ 无RNA酶和DNA酶活性TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA

勾邓栋3059RNA酶高温变性吗 -
厉寿品15050937811 ______[答案] 通常,高温、有机溶剂都能使蛋白发生不可逆的变性失活,可是为什么对RNA酶不起作用?导致提取RNA时总是异常小心谨慎,很麻烦 求解啊! 80年代初,美国Colorado大学化学与生物化学系T.R.Cech教授(1989年诺贝尔化学奖获得者)及其合作...

勾邓栋3059trizol处理的样本可以提dna吗 -
厉寿品15050937811 ______ 可以的,trizol加氯仿离心后分三层,上中下分别是rna 蛋白质 dna