trnzol法提取rna原理

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

尹俭袁848细胞总RNA提取用什么方法?
丁亮蕊18290268669 ______ 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min) 详细的操作步骤,生物帮上面有的,底座/架(自动化) http://product.bio1000.com/101206/

尹俭袁848动物组织如何提取总RNA? -
丁亮蕊18290268669 ______ Trizol法 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%. 2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖...

尹俭袁848trizol法提取RNA分成的三相分别是什么 -
丁亮蕊18290268669 ______ 上层无色,接近透明色的为RNA;中层白色(很薄)的为DNA;下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.

尹俭袁848trizol成分作用是什么 -
丁亮蕊18290268669 ______ 在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作.若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜.在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免...

尹俭袁848RNA的提取方法步骤及原理. -
丁亮蕊18290268669 ______[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...

尹俭袁848trizol法提取rna如何去除dna
丁亮蕊18290268669 ______ trizol法提取rna如何去除dna1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少;2,使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇/异丙醇等)、高纯度的Buffer、碱性溶剂等;3,如果提取的RNA中含有DNA时,也可以使用DNaseI进行DNA消化.这个如果你做反转录的话,只能是用PCR检测了.电泳基本检测不出来.象现在的试剂盒或者TRIZOL提的RNA,除质量太差,一般含基因组很少.如果RT-PCR发现结果不对,可以用那种不含RNA酶的DNA酶处理一下.如果引物能避开的话,有点DNA也没关系.

尹俭袁848trizol法提取RNA时如何去除基因组DNA 在哪一步加NDA消化酶,谢谢! -
丁亮蕊18290268669 ______ trizol法是RNA, DNA提取的,在分层的时候,看你去哪一层了.分层后, RNA是在水相,而DNA是在中间的酚-氯仿层.“一般在加入溶解细胞剂,充分 溶解...

尹俭袁848Trizol法提RNA,用DEPC水重溶RNA时,不能完全溶解,?
丁亮蕊18290268669 ______ 你的情况可能有两种可能:1. 像二楼说的那样,在用酒精洗完沉淀后,干燥过程时间太长,导致RNA不好溶解.但这种情况可像你那样在水浴中加热溶解个10min,一般是会溶的.所以你的问题看起来更像是第二种情况:2. 剩下的不溶沉淀根本不是RNA,而是在提取过程中没有去干净的杂质或蛋白.这种东西是不会溶的.而且有时不会影响RNA的质量,瞬时离心一下把沉淀甩到管底,吸上面的清液就行了;但如果提取过程中RNA发生了降解,这时即便是上面的上清液也是不能用的了.你可以先用上面的上清液跑个胶看看完整性如何.如果两条或三条带就不妨碍使用.祝顺利!

尹俭袁848Trizol法提取流感病毒 RNA -
丁亮蕊18290268669 ______ 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管; 2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀; 3、13000rpm离心15min; 4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...

尹俭袁848TRIzol法提取RNA每个步骤的作用是什么?其实自己多多少少知道,但是又不是很确定.希望知道的朋友告诉一下.因为自己还没有做这个实验,所以都是很模糊... -
丁亮蕊18290268669 ______[答案] TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性.在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中.取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相...