wb蛋白制样loading+buffer

齐剂崔1831做wb时原核表达蛋白质样品的制备为何要剪切dna
林喻姣18350214105 ______ 真核生物和原核生物的DNA差异:真核生物DNA有内含子,在转录以后需要切除内含子,而原核生物并没有切除内含子的酶系

齐剂崔1831如何提细胞的组蛋白做western blot -
林喻姣18350214105 ______ 组蛋白属于核蛋白,并且是核酸结合蛋白.做WB实验的样品处理时,可以选择核蛋白提取试剂盒,可以用supernuclease核酸酶进行核酸分子的降解.

齐剂崔1831免疫印迹与elisa和western blot有什么区别,似乎原理差别不大,谁能细致说说? -
林喻姣18350214105 ______ 酶联免疫吸附实验(ELISA) ,蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot 都是抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定. 原理都是靠免疫学的抗原抗体结合,二抗上带酶,通过与底色反应显色.区别的话WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测.WB只能用抗体去检测你的蛋白样品.ELISA可以固定抗原也可以固定抗体.WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了.

齐剂崔1831WB蛋白提取 -
林喻姣18350214105 ______ 这个应该不是Western blot的问题,应该是SDS-PAGE没有跑好造成的. 最后两个样品可能和SDS的结合不够彻底. 建议做Western的时候,同一批次样品SDS-PAGE跑两块胶,一块胶用来转膜印染,另一块胶用来考染作为对照.这样比较容易分析出Western的异常.

齐剂崔1831wb做线粒体蛋白必须将蛋白从线粒体中提取出来吗 -
林喻姣18350214105 ______ 因为线粒体蛋白是细胞亚显微结构,必须用电镜观察,可以用,免疫电镜技术,和电镜放射自显影技术.推荐第二种:1放射性同位素标记的生物大分子前体参入,2,常规方法制片,3,在样品上敷上一层溴化银乳胶(要求更严格),在暗室里曝光数天(时间更长),经显影定影后,4移至电镜下观察,银颗粒所在位置即放射同位素标记的位置.

齐剂崔1831谁知道ELISA,Western Blot,免疫组化 这三个比较有什么区别,越详细越好!谢谢了,我给加分 -
林喻姣18350214105 ______ 免疫组化 是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性...

齐剂崔1831WB实验时,细胞裂解液如何配置? -
林喻姣18350214105 ______ 组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4 2: Nacl 150 mmoL/L 3: 去氧胆酸钠 0.25% 4:NP-40或Triton-x-100 1% 5: EDTA 1 mmoL/L 6: PMSF 1 mmoL/L 7: Aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作...

齐剂崔1831如何制备免疫沉淀(IP)样本? -
林喻姣18350214105 ______ 常用于免疫沉淀的抗体量非常大(1ug),所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻链分子时,重链或者轻链分子的WB信号常常由于信号过强而导致影响对目的蛋白的WB结果判断.针对上述情况,A B clonal通常有二种解决办法: a. 选择不同种属的抗体分别进行免疫沉淀实验和WB实验,这样再选择一个种属交叉反应比较弱或者无种属交叉反应的二抗进行WB实验,就可以大大减弱重链和轻链分子的WB信号. b. 使用交联剂将抗体和Protein A/G beads交联,然后通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白-抗体-agarose beads复合物,最后离心去除抗体-agarose beads复合物,上清中只留下目的蛋白.

齐剂崔1831什么是wb实验? -
林喻姣18350214105 ______ WB实验是通过聚丙烯酰野中胺凝胶电泳(PAGE)将混合蛋白质样品分离后,利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质(例如PVDF膜)上,再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原. 与相对应的第一抗体特异性结合,之后再与酶或同位素标...

齐剂崔1831请问什么是免疫蛋白印迹(WB)试验 -
林喻姣18350214105 ______ 该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术.由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术.免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析.结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异.